El objetivo general de la presente tesis doctoral es el desarrollo de herramientas para la producción y aplicación de dos enzimas glicosídicas: una alfa-L-arabinofuranosidasa proveniente del hongo Aspergillus niger (Abf) y una beta-D-glucosidasa (Bgl), proveniente de la levadura Candida molischiana. Estas hidrolasas se utilizan tanto para liberar azúcares en procesos de conversión de biomasa y en la industria alimentaria, como en la síntesis de aminoglicósidos, glicoconjugados y oligosacáridos, compuestos de alto valor añadido para la industria químico-farmacéutica. Los genes que codifican estas enzimas se han expresado en la levadura metilotrófica Pichia pastoris, y las enzimas producidas se han purificado para caracterizar sus propiedades bioquímicas. Asimismo, se ha comprobado su capacidad para catalizar reacciones de transglicosilación con alto rendimiento. Con el fin de estudiar y monitorizar su producción, se ha planteado y validado un modelo basado en restricciones del metabolismo de P. pastoris, evaluando su consistencia mediante análisis posibilístico de flujos metabólicos. El modelo permite estimar la tasa de crecimiento y la distribución de flujos intracelulares a partir de unos pocos flujos extracelulares medidos experimentalmente. Adicionalmente, el modelo se ha extendido para estimar la productividad de proteína recombinante, y se ha empleado para analizar diferentes condiciones de cultivo de las cepas transgénicas que sobreproducen las enzimas Abf y Bgl. Finalmente, las enzimas se han inmobilizado en organosilicas bimodales de la familia UVM-7. Los biocatalizadores resultantes se han caracterizado bioquímica y físico-químicamente y se han evaluado en diferentes aplicaciones de interés biotecnológico.