Resumen La comprensión de los mecanismos moleculares que controlan la resistencia de la planta frente a patógenos biotrofos es un campo de investigación complejo y en expansión donde se impone la identificación de nuevos reguladores. Previamente se había descrito en nuestro laboratorio el gen P69C que codifica una proteasa con homología a subtilisinas y cuya expresión se induce en el transcurso de la interacción planta-patógeno. Con el fin de estudiar nuevos componentes de la planta implicados en la señalización de la respuesta defensiva, se procedió al escrutinio de mutantes de Arabidopsis thaliana que de forma constitutiva y sin la existencia de ningún estímulo externo se encontrara activada la expresión del gen GUS dirigida por el promotor P69C. En la presente memoria de tesis se describe ampliamente la identificación y caracterización del mutante, csb3 (constitutive subtilisin3). Las plantas csb3 poseen elevados niveles de ácido salicílico (SA) y además expresan genes dependientes de la ruta de SA tales como PR-1, PR-2 y GST6. Por otra parte, el mutante csb3 exhibe una elevada resistencia al oomiceto patógeno Hyaloperonospora parasitica de naturaleza biotrofa y a la bacteria patógena también biotrofa Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000 (Pst) DC3000. Sin embargo, la resistencia a patógenos necrotrofos tales como Botrytis cinerea y Plectosphaerella cucumerina permanece inalterada en las plantas csb3. Para analizar la participación de los distintos componentes de la ruta de señalización dependiente de SA en la manifestación del fenotipo de resistencia de csb3, se procedió al análisis epistático entre csb3 y pad4, sid2, eds5, nahG, npr1, dth9 y cpr1. Estos estudios indican que la elevada resistencia frente a patógenos biotrofos de las plantas csb3 requiere de todos y cada uno de los componentes de la ruta de señalización dependiente del SA estudiados. El gen CSB3 identificado por clonaje posicional codifica la 1-hidroxi-2-metil-2-butenil 4-difosfato (HDS) sintasa. Esta enzima controla uno de los pasos finales de la biosíntesis del isopentenil difosfato (IPP) de la ruta del 2-C-metil-D-eritritol-4-fosfato (MEP) que acontece en el cloroplasto. La expresión de CSB3 en plantas wt se reprime parcialmente en respuesta a la infección por Pst DC3000. Además, a través del aislamiento y la caracterización de supresores extragénicos del mutante csb3-1, junto con la complementación farmacológica con fosmidomicina (un inhibidor de la ruta MEP) del fenotipo de resistencia de las plantas csb3-1, proponemos que CSB3 podría funcionar como un regulador negativo de la ruta de señalización dependiente del SA que media la resistencia a patógenos biotrofos. Por otra parte, las plantas csb3-1 presenta niveles de expresión de dos genes que codifican proteasas con homología a subtilisinas superiores al registrado para plantas wt. Estos dos genes denominados AtSBT3.3 y AtSBT3.5 se caracterizan por una expresión que se induce de forma temprana en respuesta a Pseudomonas syringae y Plectosphaerellla cucumerina así como tras tratamiento con H2O2. Por el contrario, su expresión es completamente independiente del SA. La pérdida de función del gen AtSBT3.3 provoca un fenotipo de hipersusceptibilidad a patógenos biotrofos. Estas evidencias señalan la implicación de AtSBT3.3 y de AtSBT3.5 en el mecanismo de la resistencia frente a patógenos biotrofos.