Resúmenes Resumen en castellano Las proteínas son macromoléculas muy abundantes en los organismos vivos. Cumplen con diversas funciones vitales, como por ejemplo transportar sustancias en el organismo, actuar como enzimas, etc. En concreto, la importancia de las proteínas transportadoras (como ASH y ASB) radica en que actúan como vehículo para la distribución de una amplia variedad de sustancias endógenas y exógenas en la sangre. El estudio de la interacción fármaco/proteína es importante para conocer la biodistribución, el metabolismo, la eliminación y el efecto farmacológico del fármaco en el organismo. El número de técnicas utilizadas para la realización de este tipo de estudios es muy amplio y variado. Con estos antecedentes, se propuso desarrollar una nueva metodología que proporcionase información relevante sobre el tipo de interacciones que tienen lugar entre el flurbiprofeno y las albúminas mencionadas. Para ello se hizo uso de las técnicas de fotólisis de destello láser y de fluorescencia. Se estudiaron las especies transitorias generadas tras absorción de luz, utilizándose las propiedades de los estados excitados del FBP como parámetros cuantitativos sensibles a las características del medio. En primer lugar, se realizó la caracterización de los primeros estados excitados singlete y triplete del flurbiprofeno, identificándose sus principales procesos de desactivación. Además, se determinaron los tiempos de vida del primer estado excitado singlete y triplete, junto con los rendimientos cuánticos de los procesos fotofísicos implicados. Se pudo apreciar que especialmente el estado excitado triplete es altamente sensible al medio en el que se encuentra, lo que posibilita su uso como parámetro cuantitativo para estudiar la interacción con ASH y ASB. Conocidas las propiedades fotofísicas del fármaco, se procedió a estudiar una serie de sistemas modelo con el fin de simular el complejo no covalente que interviene en la situación real. En ellos, el FBP quedaba covalentemente unido a los aminoácidos del centro activo de la proteína más directamente implicados en la interacción con el fármaco. Así pues, se sintetizaron una serie de diadas entre el flurbiprofeno y los residuos de aminoácido triptófano y tirosina. Se observó que el estado excitado singlete fue altamente sensible a la interacción fármaco-aminoácido. En los sistemas FBP-Trp, prácticamente todos los fotones provenientes de la radiación incidente produjeron el primer estado excitado singlete del Trp, bien mediante absorción directa por este cromóforo o a través de transferencia de energía singlete-singlete desde el FBP. A continuación, tuvo lugar la desactivación intramolecular de 1Trp*, probablemente por un proceso de transferencia electrónica. Por otra parte, la desactivación estereoselectiva desde 1FBP* condujo a la formación de exciplejos, detectados por fluorescencia. Finalmente, en los experimentos de FDL se observó el primer estado excitado triplete del FBP, generado bien por transferencia de energía triplete-triplete desde el 3Trp* o por retrotransferencia electrónica desde el par de iones radicalarios. En los sistemas FBP-Tyr, no se observó un proceso de transferencia de energía del FBP a la Tyr, sino una desactivación estereoselectiva desde el estado excitado singlete del fármaco. Esta desactivación, en medio polar, podría tener lugar bien por transferencia electrónica o por formación de exciplejo, mientras que en un medio apolar el proceso de desactivación implicaría formación de exciplejo. Con el propósito de avanzar en el estudio de las interacciones fármaco/proteína, se procedió a estudiar sistemas donde ambos componentes se encontrasen en el mismo medio. Así pues, se llevaron a cabo estudios de sistemas intermoleculares FBPMe/AS y FBP/AS. En ellos, el primer estado excitado triplete resultó ser altamente sensible a la interacción con la proteína. Se observó que el tiempo de vida de triplete de FBPMe o de FBP aumenta considerablemente en presencia de proteína. Esto podía ser debido a la protección de este estado excitado frente al ataque por una segunda molécula de FBPMe o FBP, según el caso, o por ataque de oxígeno u otros reactivos. En primer lugar, se escogió el sistema FBPMe/AS. El motivo por el cual se eligió el FBPMe fue por su mayor carácter hidrofóbico, que favorecería la inclusión en el interior de AS (preferentemente en el sitio I). El estudio se realizó con las formas enantioméricas (S)- y (R)-FBPMe con el fin de detectar una posible estereodiferenciación en la interacción. En el sistema FBPMe/ASH, se observó una importante estereodiferenciación en los tiempos de vida de triplete del FBPMe cuando se encontraba unido a la proteína. Además, se evidenció la existencia de una interacción estereoselectiva entre el FBPMe y ASH, observándose una mayor preferencia por el sitio I para el enantiómero (S)-. Por otra parte, la población de los sitios I y II de ASH y ASB por FBPMe se calculó por análisis de regresión de las cinéticas de desactivación del estado excitado triplete del FBPMe a distintas relaciones de concentración FBPMe/AS. Además, se demostró que el FBPMe interaccionaba preferentemente con ASH que con ASB. Finalmente, se estudió el sistema FBP/AS, ya que el FBP es el fármaco que se suministra a los pacientes para el tratamiento de diversas dolencias. De nuevo, el análisis de regresión realizado a partir de las cinéticas de desactivación de los estados excitados triplete del fármaco en presencia de proteína permitió conocer la distribución de éste en los dos sitios de unión de mayor afinidad de AS, así como la cantidad de fármaco libre en disolución. Además, la asignación de los sitios de unión I y II ocupados por el FBP fue confirmada por los experimentos realizados mediante desplazamiento del FBP usando sondas selectivas del sitio II de la albúmina (como (S)-ibuprofeno y ácido cáprico). Por otra parte, tanto los tiempos de vida de triplete como la ocupación de los sitios de unión dependieron del tipo de albúmina escogida (albúmina sérica humana o bovina). Finalmente, se encontró una pequeña estereoselectividad en la interacción del (S)- y (R)-FBP con ASB. Resúmenes 219