Resumen La citricultura es una de las ramas de la fruticultura de mayor producción a nivel mundial, siendo España el cuarto productor y primer país exportador mundial de cítricos para consumo en fresco (FAO, 2005). La obtención de nuevas variedades que se adapten a las exigencias de mercado y de cultivo es la clave para continuar siendo competitivos. La reducción de las precipitaciones en muchas zonas agrícolas provoca que el estrés hídrico sea uno de los estreses abióticos que más limita la producción de los cultivos, entre ellos los cítricos. Aunque son numerosos los estudios orientados a conocer mejor la respuesta de la planta ante el estrés hídrico a nivel molecular en especies modelo, son pocos los trabajos realizados en relación a la respuesta al estrés hídrico en cítricos. Este trabajo tiene como objetivo el desarrollo de herramientas que nos permitan conocer mejor la respuesta de los cítricos frente a este estrés que en un futuro puedan utilizarse para conseguir cítricos que sean capaces de aprovechar mejor el agua disponible en condiciones adversas, evitando las importantes pérdidas de cosecha. El análisis global de la respuesta a estrés hídrico en cítricos se ha llevado a cabo a través de un estudio del transcriptoma de los cítricos sometidos a este estrés. Para ello se han utilizado dos abordajes, la generación de ESTs y la hibridación de micromatrices de cDNA, que han permitido identificar genes candidatos a estar implicados en la respuesta a estrés hídrico. La generación de ESTs se ha realizado a partir de la secuenciación de un total de 2296 clones aislados de dos bibliotecas de cDNA sustraido, Drought1 y Drought2, construidas a partir de hojas y raíces de plantas sometidas a estrés hídrico respectivamente. Las ESTs obtenidas han pasado a formar parte de la colección del CFGP (Citrus Functional Genomics Project). Como resultado del estudio de los unigenes resultantes de las bibliotecas construidas con material sometido a estrés hídrico, en relación con el resto de unigenes de la colección (procedentes de bibliotecas construidas con diversos tejidos sometidos a diferentes estreses), se ha determinado que la respuesta a estrés hídrico en cítricos es mucho mas específica en raíces que en hojas respecto a otros estreses y que al igual que sucede en otras especies, existe una parte de la respuesta común entre sequía, salinidad y frío y otra común entre cada par de dichos estreses. La segunda de las estrategias utilizadas ha sido la hibridación de micromatrices de cDNA, para lo cual se ha utilizado la micromatriz de primera generación del CFGP que contiene unos 7000 unigenes. Los resultados de la comparación de los unigenes inducidos y reprimidos en hojas y raíces de plantas sometidas a estrés hídrico apuntan a que existe un alto grado de especificidad de tejido en la respuesta a dicho estrés en cítricos. Además, la obtención de niveles de transcrito a las 5, 10 y 24 horas tras la aplicación del estrés ha permitido identificar dos patrones de expresión durante este periodo. El primer grupo se han denominado de “respuesta rápida prolongada”, y está formado por unigenes que alcanzan sus valores máximos de inducción o represión a las 5 horas y los mantienen durante todo el periodo de estrés. El segundo, denominado de “respuesta rápida transitoria” está formado por unigenes que alcanzan los valores máximos de inducción o represión entre las 5 y10 horas y experimentan una caída progresiva entre las 10 y las 24 horas. La clasificación funcional de los unigenes específicos de estrés hídrico obtenidos a través de estas dos estrategias ha permitido tener una visión comprensiva de la regulación transcripcional de estos genes identificados como posibles candidatos a estar relacionados con la respuesta a estrés hídrico en cítricos. Esta clasificación se ha basado en diferentes categorías funcionales, las cuales han sido seleccionadas por su importancia en la respuesta a estrés hídrico en plantas, destacándose en ambos casos la presencia de un numeroso grupo de genes de función desconocida que podrían formar parte de rutas de respuesta todavía sin determinar. Por ultimo, dando los primeros pasos en la utilización de toda la información generada a partir de este análisis global del transcriptoma de los cítricos bajo condiciones de estrés hídrico, se han iniciado tres líneas de trabajo orientadas a conocer con más detalle la implicación de algunos genes en la respuesta a dicho estrés. Los genes seleccionados pertenecen a tres grupos diferentes de conocida importancia en la respuesta a estrés en otras especies: los inhibidores de proteasas, las proteínas LEA y los osmolitos. X IX