CARACTERIZACIÓN DE CEPAS TOXIGÉNICAS DEL GÉNERO Fusarium MEDIANTE TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR.
    
    Las micotoxinas son metabolitos producidos por un amplio grupo de hongos, entre los que se encuentran los pertenecientes al género Fusarium. Se han detectado como contaminantes naturales en mayor o en menor grado en un gran número de productos agrícolas y manufacturados y, si llegan a ser consumidas, pueden causar una gran variedad de efectos tóxicos en humanos y animales. 
    
    Dentro de los cereales, el maíz es uno de los más vulnerables a la colonización por especies del género Fusarium y, por consiguiente, a la contaminación por las micotoxinas que produce dicho género. Es por ello que en este trabajo se aislaron estos hongos a partir de granos de maíz destinados al consumo humano y animal. Estos análisis, además de aportarnos los aislados necesarios para la identificación y detección de la producción de micotoxinas, sirvieron para el estudio comparativo entre los medios de cultivo Patata Dextrosa Agar (PDA) y Agar Verde Malaquita, destacándose este último por su selectividad para el aislamiento de hongos del género Fusarium frente otros géneros.
     
    Una vez obtenidos los aislados, nos centramos en la identificación por PCR de especies del género Fusarium procedentes de grano de maíz y la detección de especies productoras de tricotecenos (deoxinivalenol (DON) y nivalenol (NIV)). Como controles se utilizaron cepas de referencia: suministradas por la Colección Española de Cultivos Tipo. 
    
    De los hongos obtenidos en la primera parte de este trabajo se seleccionaron 377 pertenecientes al género Fusarium. Estos aislados fueron analizados mediante PCR utilizando diferentes iniciadores específicos. Con este método se obtuvo la identificación de las especies F. graminearum, F. proliferatum, F. oxysporum y  F. verticillioides. La técnica PCR también permitió la detección de cepas productoras de tricotecenos, así como la de aislados productores de DON. 
    
    Para comprobar la especificidad de la identificación por PCR, se realizó la secuenciación del fragmento ITS1-5.8S-ITS2 del DNA, con esta técnica se confirmó la identificación por PCR de algunos aislados y se identificaron 43 aislados que no pudieron ser identificados por PCR. También se analizó la región IGS mediante la técnica PCR-RFLP de 96 aislados, encontrándose una alta variabilidad intra e interespecifica. 
    
    Se determinó la producción de las micotoxinas deoxinivalenol (DON), 3-acetildeoxinivalenol (3-ADON), fusarenona X, 15-acetildeoxinivalenol y nivalenol, mediante cromatografía de gases con detector de masas (GS-MS), a partir de aislados crecidos en tres medios de cultivo diferentes, a distintos periodos de incubación. Para ello, se estudiaron 19 aislados de F. graminearum que previamente habían demostrado poseer los genes implicados en la producción de tricotecenos y DON. Mediante GC-MS se encontró que todas las cepas producían alguna de las micotoxinas, DON, 3-AcDON y 15-AcDON. El medio de cultivo donde se obtuvo mayor producción de micotoxinas  fue PDA a los 21 días.
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