Resumen

Estudios realizados en Atalantia citroides, un género afín de los cítricos, mostraron que estaba infectada con un viroide no descrito hasta el momento. Este nuevo viroide tiene un genoma de 293-294 nucleótidos con una alta proporción de bases GC, una región central conservada que es característica de los miembros del género Apscaviroid, y también la región terminal   conservada que tienen este y otros géneros de la familia Pospiviroidae. La estructura secundaria de mínima energía libre predicha para este nuevo viroide es una conformación en forma de varilla con un 68.7% de nucleótidos  apareados y con una identidad de secuencia respecto a los otros viroides inferior al 90%, que es el límite convenido para separar las diferentes especies de viroides dentro de un mismo género. Los ensayos de infectividad utilizando el cidro Etrog han mostrado que este nuevo viroide produce síntomas característicos suaves. La co-inoculació de este nuevo viroide con Citrus bent leaf viroid o con Citrus dwarfing viroid, que también son miembros del género Apscaviroid, causa interacciones sinérgicas que se manifiestan induciendo síntomas muy pronunciados en las hojas y un enanismo muy marcado. Este aumento en la intensidad de síntomas no está acompañado por variaciones en la acumulación del viroide en la planta ya que su concentración se mantiene inalterada en plantas co-inoculadas. De acuerdo con estas propiedades moleculares y biológicas, así como por su capacidad por replicarse en A. citroides, este nuevo viroide que tentativamente hemos nombrado Citrus viroid V (CVd-V),  ha sido propuesto como una nueva especie del género Apscaviroid.
El análisis de 64 muestras provenientes de varias zonas citrícolas ha mostrado que CVd-V está presente en los Estados Unidos, España Nepal, y el Sultanato de Oman.  Estos resultados indican que este viroide no ha surgido recientemente y está bastante difundido por diferentes partes del mundo. Los ensayos de transmisión  a naranjo, mandarino, híbridos de mandarino, clementito, satsuma, limonero, naranjo amargo, lima Tahití, lima dulce de Palestina, calamondín, bergamoto y kumquat han mostrado que todas estas especies son huéspedes de CVd-V. Se han probado  una serie de métodos de detección como el "slot blot", la hibridación "northern" y la RT-PCR utilizando tanto el cidro Etrog como bioamplificador o  directamente especies i cultivares comerciales.
Para evaluar el efecto en la expresión de síntomas que produce el intercambio de segmentos discretos de la molécula de CVd-V por los segmentos correspondientes de CDVd, se sintetizaron siete viroides quiméricos que se  inocularon mecánicamente a tres plántulas de cidro Etrog. El análisis de estas plantas mediante hibridación y RT-PCR mostró que solo una de las tres plantas inoculadas con la quimera Ch5 (CVd-V con el dominio Terminal izquierdo de CDVd) estaba realmente infectada. Se ha demostrado que esta quimera es estable salvo por la sustitución 42C®U. Las plantas infectadas con Ch5 no muestran ningún tipo de síntomas y las plantas co-infectadas con Ch5 y CVd-V o CDVd muestran los mismos síntomas que las plantas infectadas solamente con CVd-V o con CDVd, respectivamente. Estos resultados indican que el dominio terminal izquierdo está involucrado en la patogenicidad de CVd-V y que no existen interacciones entre Ch5 y los otros dos viroides. El análisis de las plantas co-infectadas ha mostrado que tanto CVd-V como CDVd desplazan a Ch5 aunque se llega a detectar a concentraciones muy bajas.
La  cachexia de los cítricos es una enfermedad producida por Hop stunt viroid (HSVd). Las variantes patogénicas y no patogénicas varían en lo que se conoce como "cachexia expression motif" que consta de cinco o seis nucleótidos localizados en el dominio variable de su estructura secundaria. Por medio de mutagénesis dirigida se obtuvieron una serie de mutantes para investigar si todos estos nucleótidos son necesarios para la infectividad y/o expresión de síntomas. Los resultados confirman que el "cachexia expression motif" juega un papel muy importante en la inducción de síntomas  y que cambios sutiles dentro de este motivo modulan su expresión, llegando incluso a suprimirla.