Resumen

El virus de las manchas necróticas del melón (MNSV) es una de las principales entidades virales que afectan a los cultivos de cucurbitáceas a nivel mundial. No obstante, existe muy poca información sobre la epidemiología de la enfermedad causada por este virus, especialmente en lo que respecta a la transmisión por semilla, a la desinfección de éstas, a la presencia y distribución del virus y de su hongo vector Olpidium bornovanus en el mundo y a la diversidad genética de ambas entidades. En este sentido, conocer estos aspectos epidemiológicos así como la variabilidad en las poblaciones de dichos agentes infecciosos es un factor clave para el manejo de la enfermedad. Del mismo modo, hay aspectos relacionados con los métodos de diagnóstico del MNSV y O. bornovanus, así como de otras especies de Olpidium, entre ellas, O. brassicae y O. virulentus, claramente mejorables, especies estas últimas citadas como transmisoras de importantes virus en diversos cultivos hortícolas, que es necesario estudiar para comprender mejor las interacciones entre los virus y sus hongos vectores, así como también para determinar el rango de hospedantes de estas entidades. La transmisión por semilla del MNSV fue evaluada en plántulas procedentes de semilla comercial de melón. Dichas plántulas, en estado de cotiledón y posteriormente en estado adulto, fueron analizadas mediante DAS-ELISA y RT-PCR para la detección del citado virus. Ningún grupo de plántulas resultó positivo al MNSV mediante DAS-ELISA. En cambio, mediante RT-PCR, la proporción de plántulas infectadas fue de al menos 7-8%, con un índice de transmisión de semilla infectada a plántula de 11.3-14.8%. Diferentes tratamientos de desinfección de semilla fueron evaluados para prevenir la transmisión por semilla del MNSV. Así pues, los resultados obtenidos sugieren que el tratamiento de 144 h a 70°C podría ser usado para erradicar el virus de las semillas de melón, sin afectar la germinación de las mismas.Debido a la importancia que adquiere O. bornovanus en la transmisión por semilla del MNSV, se ha desarrollado y puesto a punto un método multiplex PCR con la finalidad de detectar el citado hongo. Adicionalmente, mediante dicho método es posible detectar con alta sensibilidad y diferenciar otras especies de Olpidium que infectan las raíces de diferentes cultivos hortícolas, O. brassicae y O. virulentus, permitiendo distinguir dichas especies, lo que no es posible con la simple observación morfológica de las esporas de resistencia. Este método fue también efectivo en la detección de O. bornovanus en muestras de agua. Adicionalmente, la especificidad y sensibilidad del método fueron evaluadas, y el mismo fue validado con muestras de 9 diferentes cultivos procedentes de 11 países de América, Europa y África. Se ha estudiado la incidencia geográfica y la diversidad genética del MNSV y Olpidium en diferentes especies de cucurbitáceas procedentes de varios países de América Latina (Guatemala, Honduras, México y Panamá) y Europa (Italia y España). Veintinueve aislados del MNSV de estas procedencias fueron seleccionados con el objetivo de estudiar la diversidad genética de todas las proteínas que componen el genoma de este virus (p29, p89, p7A, p7B, p42), además de determinar las relaciones filogenéticas de la población del MNSV. Dicha población presento cierta variación en términos geográficos. La diversidad genética observada en las proteínas completas p7A y p7B sugiere que estas regiones codificantes se encuentran bajo una fuerte presión de selección. Por otro lado, se analizó la región ITS del DNA ribosómico en 40 aislados de Olpidium asociados con cada una de las regiones geográficas analizadas en este estudio. Estos aislados estuvieron relacionados con el hospedante en el cual fueron obtenidos. Finalmente, se realizaron dos prospecciones en 2006 y 2008 para determinar la presencia y distribución del MNSV y O. bornovanus en las principales regiones del cultivo de cucurbitáceas en Panamá, siendo identificadas estas entidades en el 12% y 45% de las muestras analizadas, respectivamente, pero solamente en muestras de melón. O. bornovanus fue observado en todas las regiones en las cuales el MNSV fue detectado. Cabe destacar en este aspecto que ni el MNSV ni su hongo vector habían sido citados en Panamá anteriormente a esta tesis. Asimismo, los aislados del MNSV y O. bornovanus obtenidos en este estudio fueron analizados molecularmente en orden de estimar su variabilidad. Adicionalmente, en 2008 fueron analizados otros virus que infectan a las cucurbitáceas, entre ellos, el CMV, SqMV, PRSV, WMV-2 y ZYMV, debido a que en ese año fueron observados síntomas similares a los que producen dichos virus. Tanto la presencia como la distribución de cada uno de ellos varían según la región y la especie de cucurbitácea analizada.