Resum

El virus de les taques necròtiques del meló (MNSV) és una de les principals entitats virals que afecten als cultius de cucurbitàcies a nivell mundial. No obstant, existix molt poca informació sobre l'epidemiologia de la malaltia causada per este virus, especialment pel que fa a la transmissió per llavor, a la desinfecció d'estes, a la presència i distribució del virus i del seu fong vector Olpidium bornovanus en el món i a la diversitat genètica d'ambdós entitats. En este sentit, conéixer estos aspectes epidemiològics així com la variabilitat en les poblacions dels dits agents infecciosos és un factor clau per al maneig de la malaltia. De la mateixa manera, hi ha aspectes relacionats amb els mètodes de diagnòstic del MNSV i O. bornovanus, així com d'altres espècies d'Olpidium, entre elles, O. brassicae i O. virulentus, clarament millorables, espècies estes últimes citades com a transmissores d'importants virus en diversos cultius hortícoles, que és necessari estudiar per a comprendre millor les interaccions entre els virus i els seus fongs vectors, així com també per a determinar el rang d'hostes d'estas entitats. La transmissió per llavor del MNSV va ser avaluada en plantes procedents de llavor comercial de meló. Dites plantes, en estat de cotiledó i posteriorment en estat adult, van ser analitzades per mitjà de DAS-ELISA i RT-PCR per a la detecció del citat virus. Cap grup de plantes va resultar positiu al MNSV per mitjà de DAS-ELISA. En canvi, per mitjà de RT-PCR, la proporció de plantes infectades va ser de, al menys 7-8%, amb un índex de transmissió de llavor infectada a plantes del 11.3-14.8%. Diferents tractaments de desinfecció de llavor van ser avaluats per a previndre la transmissió per llavor del MNSV. Així doncs, els resultats obtinguts suggerixen que el tractament de 144 h a 70°C podria ser usat per a eradicar el virus de les llavors de meló, sense afectar la germinació de les mateixes. A causa de la importància que adquirix O. bornovanus en la transmissió per llavor del MNSV, s'ha desenvolupat i posat a punt un mètode multiplex PCR amb la finalitat de detectar el citat fong. Addicionalment, per mitjà del dit mètode és possible detectar amb alta sensibilitat i diferenciar altres espècies d'Olpidium que infecten les arrels de diferents cultius hortícoles, O. brassicae i O. virulentus, permetent distingir dites espècies, que no és possible amb la simple observació morfològica de les espores de resistència. Este mètode va ser també efectiu en la detecció d'O. bornovanus en mostres d'aigua. Addicionalment, l'especificitat i sensibilitat del mètode van ser avaluades, i el mateix va ser validat amb mostres de 9 diferents cultius procedents d'11 països d'Amèrica, Europa i Àfrica. S'ha estudiat la incidència geogràfica i la diversitat genètica del MNSV i Olpidium en diferents espècies de cucurbitàcies procedents de diversos països d'Amèrica Llatina (Guatemala, Hondures, Mèxic i Panamà) i Europa (Itàlia i Espanya). Vint-i-nou aïllats del MNSV d'estes procedències van ser seleccionats amb l'objectiu d'estudiar la diversitat genètica de totes les proteïnes que componen el genoma d'este virus (p29, p89, p7A, p7B, p42), a més de determinar les relacions filogenètiques de la població del MNSV. La dita població presenta certa variació en termes geogràfics. La diversitat genètica observada en les proteïnes completes p7A i p7B suggerix que estes regions codificants es troben davall una forta pressió de selecció. D'altra banda, es va analitzar la regió ITS del ADN ribosòmic en 40 aïllats d'Olpidium associats amb cada una de les regions geogràfiques analitzades en este estudi. Estos aïllats van estar relacionats amb l'hoste en el qual van ser obtinguts. Finalment, es van realitzar dos prospeccions en 2006 i 2008 per a determinar la presència i distribució del MNSV i O. bornovanus en les principals regions del cultiu de cucurbitàcies en Panamà, sent identificats estas entitats en el 12% i 45% de les mostres analitzades, respectivament, però només en mostres de meló. O. bornovanus va ser observat en totes les regions en les quals el MNSV va ser detectat. Cal destacar en este aspecte que ni el MNSV ni el seu fong vector havien sigut citats en Panamà anteriorment a esta tesi. Així mateix, els aïllats del MNSV i O. bornovanus obtinguts en este estudi van ser analitzats molecularment en orde d'estimar la seua variabilitat. Addicionalment, en 2008 van ser analitzats altres virus que infecten a les cucurbitàcies, entre ells, el CMV, SqMV, PRSV, WMV-2 i ZYMV, pel fet que en eixe any van ser observats símptomes semblants als que produïxen els dits virus. Tant la presència com la distribució de cada un d'ells varien segons la regió i l'espècie de cucurbitàcia analitzada.