RESUMEN
      España es el principal productor de frutales de hueso y cítricos de la Unión 
Europea. Las enfermedades virales más importantes asociadas a estos cultivos son la 
sharka en frutales de hueso, causada por Plum pox virus (PPV; Potyvirus), y la tristeza 
de los cítricos, causada por Citrus tristeza virus (CTV; Closterovirus), ambas 
transmitidas mediante pulgones de forma no persistente y semipersistente, 
respectivamente. Actualmente existe un amplio conocimiento de la epidemiología de 
ambos virus en plantaciones adultas, sin embargo no existen estudios sobre su 
epidemiología en bloques vivero. Además, las características especiales de éstos, como 
un marco de plantación más reducido y la presencia de plantas con caracteres juveniles y 
con brotaciones suculentas, hace que el control de la dispersión natural de ambos virus 
sea más difícil. 
      El objetivo principal de esta Tesis Doctoral fue el estudio de los distintos 
factores que determinan la epidemiología de PPV y de CTV en vivero, con el fin de 
establecer posibles estrategias de control. Además, considerando que toda estrategia de 
control requiere en algún momento de la aplicación de métodos de detección fiables, se 
han validado métodos serológicos y moleculares para una detección viral precoz y 
precisa de las plantas infectadas en vivero antes de la comercialización del material 
vegetal. 
      Se establecieron tres parcelas experimentales de vivero durante el año 2006 en 
diferentes localidades de la provincia de Valencia.  Un vivero experimental se estableció 
en la localidad de Llíria junto a una parcela de ciruelos japoneses con un 90% de 
incidencia de PPV y otro en Carlet en una área con un 5% de incidencia de PPV. 
Además, se estableció una  parcela experimental del patrón de cítricos Citrus 
macrophylla en Moncada en una zona con una incidencia del 85% de CTV. Las parcelas 
se muestrearon para conocer la incidencia viral en diferentes períodos y se analizaron 
mediante ELISA-DASI y "Spot" RT-PCR a tiempo real en el caso de PPV y mediante 
Inmunoimpresión-ELISA en el caso de CTV.
      Los patrones de frutales de hueso más susceptibles a la infección natural por PPV 
en condiciones de alta densidad de inóculo fueron los ciruelos Adesoto 101 y Mariana 
GF8-1. Los patrones Nemaguard y Mirobolan 29C presentaron una susceptibilidad 
media, mientras los patrones Cadaman y Garnem resultaron resistentes a PPV-D 
detectándose únicamente el virus mediante RT-PCR a tiempo real. Sólo los patrones 
Adesoto 101, Mariana GF8-1 y Nemaguard, resultaron infectados en la parcela sometida 
a baja presión de inóculo.  Además, se confirmó la alta susceptibilidad a la infección 
natural a CTV del patrón C. macrophylla. 
      La dinámica poblacional de los pulgones se estableció con base en las capturas de 
trampas amarillas de Moericke y plantas pegajosas. Tanto en los viveros de frutales de 
hueso como en la parcela de C. macrophylla, mayo resultó el mes con mayor número de 
capturas. El número medio estimado de pulgones visitantes por planta en la parcela de 
Llíria durante el mes de mayo de dos años consecutivos fue de 38,1, mientras en la 
parcela de Carlet fue de 36,7. Mientras, en la parcela de C. macrophylla el número de 
pulgones visitantes por planta durante el mes de mayo fue de 387,9. La especie 
predominante durante todo el año fue Aphis spiraecola por ambos métodos de muestreo 
(más del 90% en trampas Moericke y aproximadamente el 55% en plantas pegajosas), 
otras especies encontradas frecuentemente fueron A. gossypii y Hyalopterus pruni. El 
porcentaje de pulgones PPV-virulíferos, determinado por "Squash" RT-PCR a tiempo 
real, que sobrevoló y/o aterrizaron sobre las plantas de vivero de frutales en una zona con 
una alta densidad de inóculo durante el mes de mayo (30,32%), fue más del triple que el 
determinado en una zona con una baja densidad de inóculo (7,98%). Se determinó que 
las visitas de los pulgones a las plantas de vivero y a las distintas especies de patrones de 
frutales se realizaron al azar.  Además, no se han encontrado diferencias significativas en 
el número de pulgones PPV-virulíferos que visitaron las distintas especies de patrones de 
frutales ensayados en ambas parcelas. Se determinó la inexistencia de una relación 
directa entre el número de pulgones visitantes en una planta de vivero y su superficie 
foliar. El 17,50% de los individuos que aterrizaron en C. macrophylla y/o sobrevolaron 
la parcela experimental resultaron CTV-virulíferos. 
      En Llíria, se utilizaron los patrones Nemaguard y Mariana GF8-1 para evaluar el 
efecto de la aplicación de aceites minerales en la incidencia viral. El tratamiento 
consistió en la aplicación de aceite mineral hortícola (Sunspray Ultrafine 85 % [EC] P/V) 
al 1% cada 10-12 días durante el primer año (2006), desde la brotación de las plantas 
hasta la caída de las hojas. Durante el segundo año (2007), los tratamientos se 
efectuaron con el mismo aceite cada siete días durante los meses de primavera de 
máximo vuelo de pulgones. En la parcela situada en Carlet se evaluó el tratamiento con 
aceites minerales en los seis patrones de frutales de hueso. Los tratamientos no 
impidieron la presencia viral en los viveros experimentales, pero redujeron 
significativamente la incidencia de PPV en el patrón Mariana GF8-1 en una zona con 
una alta presión de inóculo. La aplicación reiterada de aceites minerales no sólo no 
supuso un perjuicio para el desarrollo vegetativo de las plantas tratadas sino que puede 
sustituir a otros tratamientos fitosanitarios. En la parcela de C. macrophylla el uso de 
aceite no supuso reducción de la incidencia de CTV.
      Se validaron las técnicas "Spot" y "Tissue-print" RT-PCR a tiempo real, en 
comparación con ELISA-DASI e Inmunoimpresión-ELISA, respectivamente, para su 
uso rutinario en detección. La coincidencia en resultados entre "Spot" RT-PCR a tiempo 
real y ELISA-DASI fue casi perfecta para detección de PPV y la coincidencia entre 
"Tissue-print" RT-PCR a tiempo real e Inmunoimpresión-ELISA fue substancial para 
detección de CTV, según el índice kappa de Cohen. Los diferentes parámetros de 
diagnóstico calculados indican que las técnicas moleculares presentaron mayor 
sensibilidad y por tanto son recomendables cuando se requiera una muy buena precisión 
en los individuos negativos (plantas madre, material base y plantas para exportación). 
Sin embargo, las técnicas serológicas utilizadas mostraron mayor especificidad y son  
recomendables para inspección rutinaria. La combinación de técnicas serológicas y 
moleculares es recomendable para una precisión casi total de los análisis.
      Se ha demostrado como la técnica "Spot" RT-PCR a tiempo real puede ser 
utilizada con éxito en muestras compuestas de hasta diez plantas sin perder precisión en 
detección de PPV en cualquier época del año. Por el contrario,  la técnica ELISA-DASI 
mostró diferencias significativas en la precisión de la detección según la época del año y 
el número de plantas analizadas, siendo las mejores épocas para la detección de PPV 
primavera y verano seguidos de otoño y no se aconseja el uso de mezclas compuestas en 
invierno.
      Se han aplicado, por primera vez en fitopatología, modelos latentes para la 
estimación de los diferentes parámetros de diagnóstico de las técnicas "Spot" RT-PCR a 
tiempo real y ELISA-DASI. Se ha demostrado que éstos pueden ser aplicados en la 
estimación de los parámetros de diagnóstico de nuevas o ya validadas técnicas de 
detección de agentes fitopatógenos.
      Como conclusión general, esta Tesis Doctoral aporta conocimientos básicos sobre 
la epidemiología de los virus de la sharka y de la tristeza en bloques de vivero, que 
podrán ser aplicados para el diseño de estrategias de control. Además, se sugiere el uso 
de métodos de control respetuosos con el medio ambiente, como son el empleo de 
patrones poco susceptibles o resistentes a PPV y el uso de aceites minerales con residuo 
cero. También se han validado las técnicas moleculares "Spot" y "Tissue-print" RT-PCR 
a tiempo real para la detección fiable y precisa de PPV y CTV en plantas de vivero. El 
uso de ambas técnicas ofrece una mayor garantía de la sanidad del material vegetal 
analizado que otras técnicas hasta ahora empleadas.