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Descifrando el mecanismo molecular de la adhesión leucocitaria a las células endoteliales cerebrales (CECs) mediada por el microARN-155

RiuNet: Institutional repository of the Polithecnic University of Valencia

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Descifrando el mecanismo molecular de la adhesión leucocitaria a las células endoteliales cerebrales (CECs) mediada por el microARN-155

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dc.contributor.advisor Andrés Colás, Nuria es_ES
dc.contributor.advisor Romero Romero, Ignacio es_ES
dc.contributor.author Martínez Pacheco, Sarai es_ES
dc.date.accessioned 2019-02-04T15:55:58Z
dc.date.available 2019-02-04T15:55:58Z
dc.date.created 2018-09-27
dc.date.issued 2019-02-04 es_ES
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10251/116385
dc.description.abstract La disfunción de la barrera hematoencefálica (BHE) ¿¿es una causa frecuente de trastornos neurológicos como la esclerosis múltiple (MS). La presencia de moduladores inflamatorios (por ejemplo, citoquinas) inducen cambios en las células endoteliales del cerebro (CECs) de la BHE que conduce a una mayor permeabilidad paracelular y mayor adhesión de leucocitos a CECs. Estos cambios están parcialmente modulados por factores epigenéticos, como microARNs (miR). Los miR son oligonucleótidos de ARN cortos no codificantes que controlan la transcripción de genes a los niveles de ARNm. Se ha demostrado previamente que el miR-155 está muy regulado positivamente en microvasos procedente de tejidos de MS con lesiones agudas y en CECs después de la inducción de inflamación in vitro. Además, la sobreexpresión de este miR en CECs aumenta la permeabilidad paracelular, apuntando a cuatro moléculas diferentes. MiR-155 también modula la adhesión de leucocitos a CECs, sin embargo, el mecanismo molecular involucrado es aún desconocido. En 2016, se demostró que desregulación de WNK1 en leucocitos aumenta su adhesión a CECs. Además, WNK1 es una diana predicha de miR-155. Por esto, se plantea la hipótesis de que la sobreexpresión de miR-155 conduce a niveles reducidos de WNK1, lo que resulta en un aumento de la adhesión de leucocitos a CECs. Para la validación de esta hipótesis se plantean tres objetivos: estudiar si la transfección con ARNip de WNK1 aumenta la adhesión de leucocitos y analizar si la transfección con pre-miR-155 o la estimulación con citoquinas disminuyen los niveles de WNK1 en células hCMEC/D3. Para ello, hemos llevado a cabo ensayos de transfección, RT-qPCR, Citometría de flujo, Western Blot, ensayo de adhesión, Inmunocitoquímica, así como técnicas de cultivo celular. es_ES
dc.description.abstract Blood-brain barrier (BBB) dysfunction is a common cause of neurological disorders such as Multiple Sclerosis (MS). The presence of inflammatory modulators (e.g. cytokines) induce changes on the brain endothelial cells (BECs) of the BBB that leads to increased paracellular permeability and leukocyte adhesion to BECs. These changes are partially modulated by epigenetic factors such as microRNAs (miR). MiR are short non-coding RNA oligonucleotides that control gene transcription at the mRNA levels. It has previously demonstrated that miR-155 is highly upregulated in microvessels from MS tissue with acute lesions and in BECs after an inflammatory challenge in vitro. Furthermore, this overexpression of this miR in BECs increases the paracellular permeability by targeting four different molecules. MiR-155 also modulates leukocyte adhesion to BECs, however, the molecular mechanism involved is still unknown. In 2016, it was demonstrated that downregulation of WNK1 in leukocytes increases their adhesion to BECs. Furthermore, WNK1 is a predicted target of miR-155. Therefore, we hypothesize that overexpression of miR-155 leads to decreased levels of WNK1 resulting in increased leukocyte adhesion to BECs. The aims of this research project are to study whether transfection with WNK1 siRNA increases the adhesion of leukocytes and to analyze whether transfection with pre-miR-155 or stimulation with cytokines reduces WNK1 levels in hCMEC / D3 cells. For this, we carried out transfection assays, RT-qPCR, flow cytometry, Western Blot, adhesion assay, immunocytochemistry, as well as cell culture techniques. es_ES
dc.language Español es_ES
dc.publisher Universitat Politècnica de València es_ES
dc.rights Reserva de todos los derechos es_ES
dc.subject Barrera hematoencefálica (BHE) es_ES
dc.subject microARNs es_ES
dc.subject microARN-155 es_ES
dc.subject miR-155 es_ES
dc.subject células endoteliales cerebrales (CECs) es_ES
dc.subject hCMEC/D3 es_ES
dc.subject inflamación es_ES
dc.subject WNK1 es_ES
dc.subject adhesión leucocitaria. es_ES
dc.subject Blod-Brain Barrier (BBB) es_ES
dc.subject microRNAs es_ES
dc.subject microRNA-155 es_ES
dc.subject brain endothelial cells (BECs) es_ES
dc.subject inflammation es_ES
dc.subject leukocyte adhesion. es_ES
dc.subject.classification BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR es_ES
dc.subject.other Máster Universitario en Biotecnología Biomédica-Màster Universitari en Biotecnologia Biomèdica es_ES
dc.title Descifrando el mecanismo molecular de la adhesión leucocitaria a las células endoteliales cerebrales (CECs) mediada por el microARN-155 es_ES
dc.type Tesis de máster es_ES
dc.rights.accessRights Cerrado es_ES
dc.contributor.affiliation Universitat Politècnica de València. Departamento de Biotecnología - Departament de Biotecnologia es_ES
dc.description.bibliographicCitation Martínez Pacheco, S. (2018). Descifrando el mecanismo molecular de la adhesión leucocitaria a las células endoteliales cerebrales (CECs) mediada por el microARN-155. http://hdl.handle.net/10251/116385 es_ES
dc.description.accrualMethod TFGM es_ES
dc.relation.pasarela TFGM\94659 es_ES


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