Mejorar la viabilidad del esperma de la Solea senegalensis durante su almacenamiento en refrigeración

Abstract

[ES] Solea senegalensis, exhibe disfunciones reproductivas en cautiverio que limitan la producción. Los machos salvajes y F1 producen poco volumen de semen y al momento de extracción de gametos es casi inevitable la contaminación del esperma con orina, haciendo que la calidad de los espermatozoides disminuya rápidamente. Esto conlleva a que sea dificultoso el almacenamiento. El objetivo del presente estudio fue mejorar la recolección de semen y los protocolos para el almacenamiento corto refrigerado de esperma de Solea senegalensis. Se examinaron muestras de 41 machos en total divididas en 3 experimentos. En el primer experimento se examinó el efecto del lavado de los espermatozoides. Para eso se substituyó tras el centrifugado el plasma seminal por solución Leibovitz. En el segundo experimento se examinó el efecto de la composición de los medios extensores en la calidad de los espermatozoides durante el almacenamiento. El medio extensor de solución Leibovitz se usó para lavar los espermatozoides. Para mejorar la composición del medio extensor, se prepararon soluciones agregando antioxidantes (BHT) y nutrientes (glutamina y glicina). En el tercer experimento, para mejorar la recolección de esperma, los gametos se recolectaron directamente en una jeringa que contenía el medio extensor Leibovitz. Los parámetros de calidad como el porcentaje de motilidad, las concentraciones de trifosfato de adenosina (ATP) y peroxidación lipídica en forma de malondialdehído (MDA) se midieron en relación con el tiempo de almacenamiento en los diferentes tratamientos. En el primer experimento, efecto del lavado en la calidad del esperma, los resultados muestran que los tratamientos de lavado con solución Leibovitz una sola vez (D-1C) y diluido (D) no tienen diferencias significativas entre ellos, y que ambos tratamientos tiene un efecto significativo respecto al tratamiento de lavado dos veces (D-2C). El mejor resultado en cuanto al mantenimiento de la motilidad por mayor tiempo (24h) fue el tratamiento de diluir (D), y el tratamiento de lavar una vez (D-1C) tuvo la mejor velocidad curvilínea (VCL) a las 24h. En el segundo experimento, composición de los medios extensores y su efecto en la calidad de los espermatozoides durante el almacenamiento, se encontraron diferencias significativas entre los diferentes medios extensores preparados y comparados con el extensor comercial de solución Leibovitz. En general hubo una disminución del contenido de ATP en los distintos tratamientos. Las solución salina y la solución salina enriquecida lograron mantener el ATP, mientras que la solución Leibovitz y la muestra control fueron los tratamientos con contenidos bajos no significativos de ATP a las 24h. En general no hubo un aumento significativo de MDA en los distintos tratamientos. No existen diferencias significativas entre los distintos tratamientos en el MDA y la VCL. En el tercer experimento, recolección de gametos en solución Leibovitz, la forma de recolección del esperma en una jeringa conteniendo solución Leibovitz, supuso un aumento de motilidad claramente significativo en comparación con la forma establecida de obtener el esperma.

[EN] Solea senegalensis, exhibits reproductive dysfunctions in captivity that limit production. The wild and F1 males produce little semen volume and the time of extraction of the gametes it is inevitable that the sperm is contaminated with urine causing the quality of the sperm to rapidly decrease making storage difficult. The objective of this study was to improve semen collection and protocols for short term refrigerated storage of sperm from Solea senegalensis. Samples from 41 males were examined in total, divided into 3 experiments. In the first experiment the effect of sperm washing was examined, in the second experiment the effect of the composition of the extender media on the quality of the sperm during storage was examined. Leibovitz solution extender medium was used to wash sperm. To improve the composition of the extensor medium, solutions were prepared with antioxidants (BHT) and nutrients (glutamine and glycine). In the third experiment, to improve sperm collection, the gametes were collected directly in a syringe containing Leibovitz extender medium and the quality of the sperm was compared with the gametes collected without extender. Quality parameters such as motility percentage, concentrations of adenosine triphosphate (ATP) and lipid peroxidation in the form of malondialdehyde (MDA) were measured in relation to storage time in the different treatments. In the first experiment, effect of washing on sperm quality, the results show that washing treatments with Leibovitz solution once (D-1C) and diluted (D) have no significant differences between them, and that these two treatments have a significant effect on the wash twice treatment (D-2C). The best result of maintaining motility for a longer time (24h) was the dilute treatment (D), and the wash once treatment (D-1C) had the best curvilinear speed (VCL) at 24h. In the second experiment, composition of the extender media and its effect on sperm quality during storage, significant differences were found between the different extender media prepared and compared with the commercial solution extender Leibovitz. In general there was a decrease in ATP content in the different treatments. The saline solutions and the enriched saline solution managed to maintain the ATP, while the Leibovitz solution and the control sample were treatments with low non-significant ATP contents at 24h. In general there was no significant increase in MDA in the different treatments. There are no significant differences between the different treatments in the MDA and the VCL. In the third experiment, collection of gametes in Leibovitz solution, the form of sperm collection in a syringe containing Leibovitz solution, had a significatively increase of motility compared to the established way of obtaining the sperm.