Inmunolocalización de la seroalbúmina humana en cloroplastos de plantas de tabaco (Nicotiana tabacum) transformadas

Abstract

La seroalbúmina humana (HSA) es una importante proteína encargada de regular la presión osmótica y de transportar diferentes ligandos. Cuando existe una disminución acusada de ella en sangre es necesario restituirla mediante transfusiones. Debido a ello existe una alta demanda de ésta proteína, pero faltan métodos de producción comercialmente viables. Es por ello que actualmente se plantea el uso de las plantas como biofactorías. En los últimos años se ha empleado el tabaco (Nicotiana tabacum) como planta modelo en la obtención de proteínas de interés a través de la transformación de cloroplastos. Un estudio previo demostró que la HSA se acumulaba en el estroma de los cloroplastos en forma de cuerpos de inclusión. Como continuación de ese estudio se planteó la idea de realizar construcciones de plantas transformadas con HSA para formar proteínas de coexpresión y de fusión con tiorredoxinas (Trxs) con el fin de potenciar la solubilidad y estabilidad de la proteína dado que resultados similares se habían obtenido en microorganismos recombinantes como Escherichia coli y, conociendo el origen endosimbiótico de los plastidios era de esperar que se produjera un efecto similar. Para ello se realizó un análisis mediante microscopía electrónica de transmisión (MET) siendo necesaria la preparación previa del material a través de un protocolo eficiente. Éste fue el primero de nuestros objetivos. El segundo objetivo abordado fue el estudio de la expresión de HSA y las Trxs y su correlación con cambios estructurales dentro de los cloroplastos entre las líneas transgénicas. Nuestros resultados indicaron que cuando ambas proteínas se expresaban en forma de una única proteína de fusión, ésta aparecía expresada en mayor cantidad aunque precipitaba formando cuerpos de inclusión. En cambio si ambas proteínas se coexpresaban independientemente, aumentaba su solubilidad y se evitaban dichos cuerpos. Estos resultados demuestran que la coexpresión de HSA con Trxs es una aproximación útil de la aplicación práctica de ésta tecnología.