Detección de Salmonella spp. y Listeria monocytogenes en verduras orgánicas

Abstract

[ES] En este trabajo se ha estudiado la presencia de Salmonella spp. y Listeria monocytogenes en verduras orgánicas, utilizando técnicas de cultivo basadas en métodos normalizados y comparando la efectividad de diferentes medios de aislamiento. Estos resultados se han comparado con la detección molecular de la presencia de estos microorganismos utilizando la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Para la realización del trabajo experimental se han seleccionado verduras cultivadas en condiciones adecuadas para denominarlas orgánicas, de venta al público, como muestras de lechuga, espinacas, fresas, entre otros. El estudio de la presencia de los microorganismos seleccionados se ha valorado con análisis de presencia/ausencia con métodos normalizados realizando los cuatro pasos fundamentales de preenriquecimiento, enriquecimiento, aislamiento e identificación. La capacidad de recuperación de los microorganismos presentes en la muestra por diferentes medios de aislamiento se ha valorado con recuentos microbiológicos a partir de las muestras inoculadas con una concentración conocida de los microorganismos seleccionados. La detección molecular de la presencia de estos microorganismos se ha realizado en los medios de preenriquecimiento, por amplificación de secuencias específicas de cada microorganismo tras la extracción del DNA de las muestras. Los resultados obtenidos en este estudio, mediante métodos culturales, indican la ausencia tanto de Salmonella spp. como de Listeria monocytogenes en las muestras de vegetales analizadas. La experiencia no ha presentado resultados lo suficientemente determinantes para evaluar la eficacia de los medios de cultivo para Salmonella spp. En cuanto a los medios utilizados para Listeria monocytogenes, el medio de cultivo PALCAM ha demostrado ser más selectivo. Finalmente, no se pudieron obtener resultados concluyentes de la detección mediante la técnica de PCR, debido a la aparición de falsos negativos ocasionados por algún factor en las muestras que interviene y no permite la amplificación.

[EN] In this study, the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes in organic vegetables has been examined applying culture techniques based on standardised methods and comparing the effectiveness of different means of isolation. These results have been compared with the molecular detection of the presence of these microorganisms using the Polymerase Chain Reaction (PCR) method. In order to carry out the experimental work, vegetables grown in conditions suitable to be considered organic and for sale to the public were selected, such as samples of lettuce, spinach, strawberries, among others. The study of the presence of the selected microorganisms has been assessed according to a presence/absence analysis with standardized methods taking the four fundamental steps of pre-enrichment, enrichment, isolation and identification. The recovery capability of the microorganisms present in the sample by different means of isolation has been assessed with microbiological counts from the samples inoculated with a known concentration of the selected microorganisms. Molecular detection of the presence of these microorganisms was performed on the pre-enrichment methods by amplification of specific sequences of each microorganism after DNA extraction from the samples. The results obtained in this study, in which cultural methods have been used, indicate the absence of both Salmonella spp. and Listeria monocytogenes in the vegetable samples analyzed. The experience has not presented results sufficiently determinant to evaluate the efficacy of the culture methods for Salmonella spp. Regarding the means used for Listeria monocytogenes, the PALCAM culture medium has proved to be more selective. Finally, it was not possible to obtain conclusive results of the detection by PCR technique, due to the appearance of false negatives caused by some factors in the samples that intervene and do not allow amplification.