Estudio del papel de p2x7r en la progresión tumoral mediada por las células madre de cáncer en el cáncer de páncreas

Abstract

[ES] El adenocarcinoma de páncreas es uno de los cánceres más agresivos y con peores tasas de supervivencia hoy en día debido a su resistencia a los tratamientos actuales, los diagnósticos tardíos y su capacidad de metastatizar. Estos tumores se caracterizan por tener un estroma muy rígido y mal vascularizado, donde el microambiente tumoral formado por células estrelladas pancreáticas, fibroblastos asociados a cáncer, células inmunes, endoteliales o células madre de cáncer (CSC) entre otras, juega un papel muy relevante. Además, la existencia de las CSC puede explicar la capacidad de algunos tumores de resistir a las terapias actuales ya que éstas son capaces de sobrevivir a los tratamientos, producir progenie diferenciada, metastatizar y regenerar nuevamente el tumor. Existen receptores purinérgicos que regulan la proliferación y diferenciación celular, como P2X7, un receptor ionotrópico activado por ATP que se expresa ampliamente en linajes de células tumorales. Este receptor puede estar involucrado en la plasticidad de las CSC, favoreciendo su agresividad, tumorigenicidad y "stemness". Los datos preliminares del laboratorio demostraban que P2X7R está sobreexpresado en las CSCs. Para evaluar el potencial de P2X7R como biomarcador de CSCs en cáncer de páncreas, se sortearon células marcadas con anticuerpo anti-P2X7R y se realizaron diversos ensayos para evaluar la capacidad stem de dichas células, mostrando resultados inesperados, ya que las células unidas al anticuerpo tenían una menor capacidad stem y de formar tumores que las células no marcadas, llevándonos a plantear la nueva pregunta que se evalúa en este trabajo: ¿es posible que la unión del anticuerpo al receptor actúe como un bloqueante o inhibidor de dicho receptor afectando así a las capacidades stem de dichas células? Por tanto, el objetivo de este trabajo consiste en evaluar el papel de P2X7R en las CSC y su posible implicación en la capacidad stem. Para ello, se han llevado a cabo experimentos con células tratadas con el anticuerpo específico para P2X7R, técnicas de modificación genética para silenciar o eliminar el gen diana (como CRISPR Cas9 y shRNA), o ensayos in vivo con ratones inmunocomprometidos; entre otros.

[EN] Pancreatic adenocarcinoma is one of the most aggressive cancers with the worst survival rates nowadays due to its resistance to current treatments, late diagnoses, and its ability to metastasize. These tumors are characterized by having a very rigid and poorly vascularized stroma where the tumor microenvironment formed by pancreatic stellate cells, cancer-associated fibroblasts, immune cells, endothelial cells, or cancer stems cells (CSCs), among others, plays a relevant role. Additionally, the existence of CSCs may explain the ability of some tumors to resist current therapies since these cells are able to survive treatments, produce differentiated progeny, metastasize, and regenerate the tumor. There are purinergic receptors involved in cell proliferation and differentiation regulation, such as P2X7. It is an ionotropic receptor activated by ATP highly expressed in tumor cell lineages. This receptor may affect CSC plasticity, promoting its aggressiveness, tumorigenicity, and stemness. Preliminary data from the laboratory demonstrated that P2X7R is overexpressed in CSCs. To evaluate P2X7R potential as a CSC biomarker in pancreatic cancer, cells marked with an anti-P2X7R antibody were sorted. Different assays were carried out to test the stem capability of these cells. The results were unexpected because antibody-bound cells showed lower tumor formation and lower stem ability than unstained cells. These led us to propose a new question: does the antibody play the role of a blocker or an inhibitor when it binds to the receptor, thus affecting the stem abilities of these cells? Therefore, this study aims to evaluate P2X7R's role in CSCs and its involvement in its stemness ability. For that purpose, experiments with cells treated with the specific antibody for P2X7R, genetic modification techniques to silence or knock out the target gen (such as CRISPR Cas9 and shRNA), or in vivo assays with immunocompromised mice were developed.