Desarrollo de un inmunoensayo multianalito, basado en anticuerpos monoclonales, para la determinación de plaguicidas N-metilcarbamatos en frutas y hortalizas

Abstract

El objetivo de esta tesis fue desarrollar un ELISA multianalito, basado en anticuerpos monoclonales, para los plaguicidas N-metilcarbamatos carbaryl, carbofuran y methiocarb. Para ello se desarrollaron en primer lugar ELISAs individuales para carbofuran y methiocarb. Posteriormente estos inmunoensayos, junto con el de carbary1, previamente desarrollado en el LIB, se integraron en un ELISA multianalito. Para producir anticuerpos monoclonales frente a carbofuran y methiocarb se sintetizaron tres compuestos para cada analito, con un brazo espaciador carboxílico de diferente longitud introducido en el grupo carbamato de la estructura del analito. Posteriormente, estos compuestos fueron conjugados a proteínas y utilizados para inmunizar ratones. Los anticuerpos monoclonales producidos fueron caracterizados en los formatos de ELISA de conjugado inmovilizado (C1) y anticuerpo inmovilizado (Al), usando otros compuestos sintetizados como haptenos heterólogos de ensayo. Los anticuerpos de methiocarb LIB-MXNB31 y de carbofuran LIB-BFNB67, en combinación con los haptenos de methiocarb (DPNI-1 y MCNH) y de carbofuran (BFNH), acoplados a ovoalbúmina y a peroxidasa, respectivamente, se utilizaron para desarrollar ELISAs en los formatos Cl y Al, respectivamente. Los inmunoensayos desarrollados para carbofuran y methiocarb mostraron valores de I5o aproximadamente de 0.7 y 0.03 ng/ml, respectivamente. Los ELISAs de methiocarb fueron muy específicos, mientras que los de carbofuran reconocieron algunos compuestos estructuralmente similares. Los inmunoensayos de carbofuran y methiocarb, junto con el de carbary1, fueron validados frente a HPLC, como método de referencia, en el análisis de muestras purificadas de frutas y hortalizas, obteniéndose una buena correlación entre métodos. Asimismo, se demostró que estos ELISAs puede ser aplicados al análisis de carbary1, carbofuran y methiocarb en extractos crudos, obteniéndose incluso mejores resultados que en las muestras purificadas.........