Vitrificación y conservación de mórulas de conejo en etilenglicol a -80ºc y a -196ºc

Abstract

[ES] Desde que en los años 50 se demostrase la posibilidad de congelar y preservar con éxito células animales como espermatozoides, óvulos y embriones a -196ºC, la crioconservación ha sido una herramienta más al servicio de la Biomedicina y la Producción Animal. La finalidad de los procedimientos de crioconservación es el establecimiento de bancos criogénicos de células, tejidos y germoplasma, transformados o no, con el fin de preservar, conservar, gestionar o facilitar su difusión. La exportación de los embriones crioconservados por vía aérea viene realizándose en criobancos secos de nitrógeno (-196ºC), ya que su transporte y/o almacenamiento a temperaturas superiores puede ocasionar daños irreversibles en los embriones. Por ello, en este trabajo se evaluó la viabilidad de mórulas de conejo vitrificadas y almacenadas a -196ºC y -80ºC en una solución de vitrificación compuesta por 42,5% (v/v) Etilenglicol, 18% (peso/v) Dextrano y 1,01 M Sacarosa. Se utilizaron un total de 305 embriones, de dos líneas genéticas de conejo (A y V), de los que 85 fueron utilizados como controles, 105 como vitrificados y mantenidos a -196ºC y el resto (96) se vitrificaron y mantuvieron a -80ºC durante 15 días. Los resultados obtenidos para los mantenidos a -80ºC fueron negativos, ninguno de ellos sobrevivió a dicha temperatura. Sin embargo, la viabilidad in vitro e in vivo de los embriones mantenidos a -196ºC se encuentra dentro del rango obtenido en estudios anteriores sobre la vitrificación de embriones de conejo. Así, in vitro se observó una tasa de desarrollo a blastocisto del 47 al 93%, siendo favorable para la línea A frente a la línea V. El estudio in vivo realizado sobre la línea A mostró unas tasas de implantación y de nacimiento respectivamente del 60,8% y 51,9%, resultados similares a los obtenidos con embriones transferidos sin vitrificar (control).

[EN] Since in the 50´s it was demostrated the possibility to successfully freeze and preserve animals cells as sperm, oocytes and embryos at -196ºC, the cryoconservation has been an tool in habitual Biomedicine and Animal Production. The purpose of crioconservation procedures is the establishment of cryogenics cell, tisues and germplasm banks, transformed or not, in order to preserve, conserve, manage or facilitate their spreading. The export of cryopreserved embryos by plane, has been performed in dry shipper cryobanks (-196ºC) because their transport or storage at high temperatures can cause irreversible cell damage in the embryos. Thus, the aim of this work was to evaluate the viability of rabbit morulaes vitrified and storage at -196ºC and -80ºC in a vitrified solution containing 42.5% (v/v) Ethylene, 18% (weigh/v) Dextran and 1.01M Sucrose. 305 embryos were used from two genetics rabbit lines (A and V), 85 were used as fresh control, 105 as vitrified and storaged at -196ºC and the rest (96) were vitrified and storaged at -80ºC for 15 days. The results obtained for the embryos storaged at -80ºC were negative, none of them survived at this temperature. However, the in vitro and in vivo viability of embryos stored at -196ºC is between the range obtained in the previous studies about vitrified rabbit morulaes. Thereby, it was observed that the rate of in vitro embryo development was between 47 to 93%, being better for line A than for line V. The in vivo study performed on the line A showed that implantation and birth rates were 60.8 and 51.9 respectively, similar to results obtained for control embryos transferred (whitout vitrified).