Estudio de la regulación transcripcinal y posttraduccional de los Arestin Related Trafficking Adaptors (Art4 y Art7) bajo la influencia de diferentes fuentes de carbono en el organismo Saccharomyces cerevisiae

Abstract

[ES] Para mantener la viabilidad celular, las células necesitan adaptarse a los cambios en el medio. La endocitosis de transportadores de membrana mediada por ubiquitinación, juega un papel importante en este proceso ya que, proporciona el mecanismo para eliminar proteínas transportadoras de la membrana celular. Arrestin-related Trafficking Proteins (ARTs) son importantes reguladores de la endocitosis en levadura. Estas facilitan la ubiquitinación de proteínas diana por la E3 ubiquitina ligasa, Rsp5. Otro posible mecanismo de regulación de la composición proteica de la membrana, previo a la endocitosis de transportadores, es la regulación transcripcional. En un estudio previo de nuestro grupo, se observo un incremento en la expresión del transportador de glucosa de alta afinidad Hxt6 en cepas mutantes art4 y art7 al cambiar la fuente de carbono. En trabajo que se presenta, se midió la actividad del promotor de HXT6 en la cepa silvestre y en los mutantes art4 y art7 bajo la presencia de diferentes fuentes de carbono, para determinar si los cambios previamente observados en la expresión del transportador de alta afinidad Hxt6 se deben a una regulación transcripcional. Por otra parte, se pretendió observar diferencias en el fenotipo tanto de mutantes para art4 y art7 como en cepas que sobreexpresan los genes ART4 y ART7 cuando son cultivadas con diferentes fuentes de carbono. Además, se intentó determinar mediante western blot, diferencias en la expresión de estas proteínas cuando se cultivaban en medios con diferente fuente de carbono y siempre bajo el control de su propio promotor.

[CA] Per mantindre la viabilitat cel·lular, les cèl·lules necessiten adaptar-se als canvis en l’entorn. La endocitosis de transportadors de membrana mitjançant ubiquitinació, juga un paper important en aquest procés ja que, proporciona el mecanisme per a eliminar proteïnes transportadores de la membrana cel·lular. Arrestin-related Trafficking Proteins (ARTs), son importants reguladors de l’endociticis en llevat. Estes faciliten l’ubiquitinació de proteïnes diana mitjançant la E3 ubiquitina lligasa, Rsp5. Altre possible mecanisme de regulació de la composició proteica de la membrana, previ a l’endocitosi de transportadors, es la regulació transcripcional. En un estudi previ d’aquest grup, es va observar un increment en l’expressió del transportador de glucosa d’alta afinitat Hxt6 en soques mutants art4 y art7 al canviar la font de carboni. En el treball que aquí es presenta, es va mesurar l’activitat del promotor HXT6 en la soca silvestre y en els mutants art4 y art7.baix la presencia de diferents fonts de carboni, per tal de determinar si els canvis prèviament observats en l’expressió del transportador Hxt6 es deuen a una regulació transcripcional. Per altra banda, es pretengué observar diferencies al fenotip tant de mutants art4 y art7 com en soques que sobreexpresaven aquestos gens quan son cultivades en diferents fonts de carboni. A més a més, es va intentar determinar mitjançant western blot, diferencies en la expressió de estes proteïnes quan eren cultivades en medis de cultiu amb diferent font de carboni y sempre baix el control del seu propi promotor.

[EN] To maintain cell viability, cells need to adapt to changes in the environment. The endocytosis of membrane transporters mediated by ubiquitination, plays an important role in this process since, it provided the mechanism to remove transporter proteins from the cell membrane. Arrestin-related Trafficking Proteins (ARTs) are important regulators of endocytosis in yeast. Those facilitate the ubiquitination of target proteins by the E3 ubiquitin ligase, Rsp5. Another possible regulation mechanism of membrane protein composition, prior to endocytosis of transporters is transcriptional regulation. In a previous study from our group, was observed an increase in the expression of high-affinity glucose transporter Hxt6 in mutant strains art4 and art7 when changing the carbon source. In the work presented, the HXT6 promoter activity in the wild type strain and in mutant art4 and art7 was measured under the presence of different carbon sources, to determine if the changes previously observed in the expression of high-affinity transporter Hxt6 were due to transcriptional regulation. On the other hand, was intended to observe differences in the phenotype of both mutants art4 and art7 and in strains over expressing genes ART4 and ART7 when are cultivated with different carbon sources. In addition, we attempted to determine by Western blot, differences in expression of these proteins when were grown in media with different carbon source and always under the control of its own promoter.