Interacciones fármaco-proteína en estados excitados

Abstract

Recientemente se ha usado la técnica de fotólisis de destello láser para el estudio de las interacciones fármaco/proteína, demostrando que el estado excitado triplete es muy sensible al medio que le rodea y que, por tanto, puede ser utilizado como sonda para estudiar la unión fármaco-proteína. Teniendo esto en cuenta, se propuso profundizar en el conocimiento de las interacciones fármaco-proteína mediante ésta técnica, extendiendo el estudio a albúminas séricas de otras especies también usadas en experimentos con fármacos, así como a otras proteínas transportadoras como puede ser AAG. En primer lugar, se llevo a cabo la síntesis del glucurónido del FBP (FBPGluc) y su posterior caracterización fotofísica para luego realizar un estudio de interacción de FBP, FBPMe y FBPGluc con albúminas de diversas especies con el fin de detectar diferencias respecto a ASH. Esto se llevo a cabo con ambos enantiómeros para detectar una posible estereodiferenciación en su interacción con la proteína. Analizando las curvas de desactivación obtenidas deducimos que, efectivamente, existen diferencias en la unión del fármaco y sus derivados a las ASs respecto a ASH, tanto en el número de sitios de unión, como en los valores de tiempo de vida de triplete del sustrato dentro de la proteína. Además, se encontró estereodiferenciación en algunos de los sistemas esstudiados. A continuación se procedió a estudiar la actividad glucuronidasa de las diferentes albúminas sobre FBPGluc, aprovechando las diferencias en los tiempos de vida de triplete de éste respecto a FBP. Observamos como el proceso de hidrólisis tiene lugar a mayor velocidad dentro de la proteína y a temperatura fisiológica. Como otra aplicación interesante de ésta metodología se procedió al estudio de interacción de cada sustrato con ASH y AAG presentes simultáneamente.