Estudio histológico del efecto de la aplicación de tricostatina durante la inducción de embriogénesis en microsporas de Brassica napus

Abstract

[EN] Microspore culture is a useful tool to produce doubled haploid individuals for plant breeding in a way cheaper and faster than through conventional crosses. This technique has been studied in many species and it depends on several factors, such as genotype, culture and donor plant conditions, etc. Efficiency of microspore cultures can be i mproved by modifying the above factors, but also by using compounds that increase such efficiency. One of these compounds is trichostatin A (TSA). It is a histone deacetylase inhibitor, which causes a change in the cell epigenetics and activates some genes . Also causes an increase in embryogenesis efficiency, increasing the number of embryos and dividing cells in culture. In this research, the effects of TSA, in terms of embryogenesis efficiency and at the cellular level, have been evaluated in cultured mic rospores of rapeseed and pepper. For this, rapeseed and pepper microspore cultures were subjected to different treatments (control, DMSO, 0.05 μM TSA and 0.5 μM TSA). Cultured microspores were processed and sectioned for observation at the light microscope , stained with four different dyes: toluidine blue, coomassie blue, iodine - potassium iodide and Sudan Black.

[ES] El cultivo de microsporas es una técnica muy util en mejora vegetal para obtener individuos dobles haploides de forma más rápida y económica que mediante cruces convencionales. Esta técnica se ha estudiado en muchas especies y se ha confirmado que depende de diversos factores como el genotipo, las condiciones de cultivo, de la planta donante de microsporas, etc. La eficiencia del cultivo de microsporas se puede mejorar modificando los factores anteriores, pero también mediante el u so de compuestos que la aumentan. Uno de estos compuestos es la tricostatina A (TSA). Es un inhibidor de la histona desacetilasa, lo que provoca un cambio en la epigenética de la celula y activa algunos genes. Además, provoca un aumento de la eficiencia en embriogénesis, aumentando el número de embriones y de células en división en el cultivo. En el presente trabajo se evalúan los efectos, tanto a nivel de respuesta embriogénica como a nivel celular, del TSA en cultivos de microsporas de colza y de pimiento . Por ello, se realizaron diversos cultivos de microsporas de colza y de pimiento y se aplicaron diferentes tratamientos (control, con DMSO, con 0'05 μM de TSA y con 0'5 μM de TSA). Las microsporas se procesaron para ser cortadas y observadas mediante micr oscopía óptica, aplicando cuatro tinciones distintas: azul de toluidina, azul coomassie, yodo - yoduro potásico o lugol (lugol) y Sudan Black.