Cañete Nieto, Mª AdelaFont de Mora Sainz, JaimeCoronado Mondragón, Ester2025-04-192025-04-192025-02-272026-02-27https://riunet.upv.es/handle/10251/219958[ES] El neuroblastoma de alto riesgo (HR-NB) representa un importante desafío clínico debido a la resistencia a los tratamientos actuales y a la escasez de mutaciones accionables que permitan enfoques terapéuticos personalizados. Este estudio se centró en investigar las interacciones entre el microambiente inmune tumoral (TIME) y los subtipos de HR-NB, con el objetivo de identificar estrategias capaces de potenciar la respuesta inmune y superar la resistencia al tratamiento. Los tumores con deleción de 11q presentaron un perfil inflamatorio caracterizado por niveles elevados de células T CD8+, células T CD4+ de memoria en reposo y macrófagos asociados al tumor (TAMs). Además, mostraron altos niveles de los mediadores inmunosupresores PD-L1, IL-10, TGF-ß1 e IDO-1. Observamos que las células de NB promovían la polarización de los TAMs hacia un fenotipo M2, favoreciendo así la proliferación tumoral y la plasticidad del linaje mesenquimal. Al evaluar el impacto de los macrófagos en la eficacia de la terapia con CAR-T, descubrimos que los macrófagos M2 reducían la eficacia de las CAR-T dirigidas contra PHOX2B al reducir la expresión de MHC I. Por el contrario, los macrófagos M1 mantenían o incluso aumentaban esta expresión, mejorando la presentación de antígenos y la efectividad de las CAR-T. Asimismo, los tumores primarios de HR-NB con deleción de 11q mostraron una marcada inestabilidad genómica, evidenciada por numerosas aberraciones cromosómicas segmentarias (SCAs). Estos tumores también presentaron una menor expresión de genes clave para la reparación del ADN, como ATM, H2AX, CHEK1 y MRE11A, sin mutaciones adicionales en dichos genes e independientemente de la metilación de su promotor. Paralelamente, identificamos que la hipermetilación de RASSF1A era un evento común tanto en tumores amplificados para MYCN como en aquellos con deleción de 11q, actuando como un marcador pronóstico negativo. También identificamos una firma epigenética compuesta por 52 sitios CpG que permite distinguir ambos subtipos de HR-NB y regula genes clave como CSF1R y CCR7, asociados al reclutamiento de macrófagos y linfocitos, la supresión inmune y un pronóstico desfavorable. En conclusión, nuestros hallazgos subrayan el papel crítico de los TAMs en los mecanismos de resistencia del NB y respaldan el desarrollo de estrategias terapéuticas dirigidas contra estos macrófagos como una vía prometedora para reforzar la respuesta inmune antitumoral y mejorar el pronóstico de los pacientes con HR-NB.[CA] El neuroblastoma d'alt risc (HR-NB) continua sent un repte clínic a causa de la resistència als tractaments actuals i l'escassetat de mutacions accionables per a enfocaments personalitzats. Aquest estudi es centra en les interaccions entre el microambient immune tumoral (TIME) i els subtipus de HR-NB per a identificar noves estratègies terapèutiques que milloren les respostes immunitàries i superen la resistència al tractament. Vam observar que els tumors amb deleció en 11q presentaven un perfil inflamatori caracteritzat per nivells elevats de cèl·lules T CD8+, cèl·lules T CD4+ de memòria en repòs i macròfags associats al tumor (TAMs), juntament amb mediadors immunosupressors alts com PD-L1, IL-10, TGF-ß1 i IDO-1. Les cèl·lules de NB polaritzaven de manera consistent els macròfags cap a un fenotip M2, promovent la proliferació tumoral i la plasticitat de llinatge mesenquimal. A més, vam evaluar l'impacte dels macròfags en l'eficàcia de la teràpia CAR-T, descobrint que els macròfags M2 deterioraven la funció de les CAR-T específiques de PHOX2B al reduir l'expressió de MHC I. En canvi, els macròfags M1 milloraven l'eficàcia de les CAR-T al mantindre o augmentar aquesta expressió, potenciant la presentació d'antígens. Els tumors primaris de HR-NB amb deleció en 11q van mostrar una inestabilitat genòmica significativa, caracteritzada per nombroses aberracions cromosòmiques segmentàries (SCAs). Vam trobar una reducció en l'expressió de gens essencials per a la resposta al dany en l'ADN, com ATM, H2AX, CHEK1 i MRE11A, sense mutacions addicionals detectables. Cal destacar que aquesta reducció era independent de la metilació del promotor. A més, la hipermetilació de RASSF1A va sorgir com un esdeveniment comú en tumors amplificats per a MYCN i amb deleció en 11q, així com un marcador pronòstic negatiu en aquests casos. Una signatura específica de 52 llocs CpG va diferenciar els HR-NB amb deleció en 11q dels subtipus amplificats per a MYCN, regulant gens de mal pronòstic com CSF1R i CCR7, relacionats amb el reclutament de macròfags i limfòcits i la supressió immune. En conclusió, les nostres resultats subratllen el paper fonamental dels TAMs en la mediació dels mecanismes de resistència en el NB, donant suport al seu ús com a objectiu en estratègies de medicina de precisió per a millorar la immunitat antitumoral i els resultats del tractament en pacients d'alt risc.[EN] High-risk neuroblastoma (HR-NB) remains a clinical challenge due to resistance to current treatments and limited actionable mutations for personalized approaches. Our study focused on the interactions between the tumor immune microenvironment (TIME) and HR-NB subtypes to identify novel therapeutic strategies for enhancing immune responses and overcoming treatment resistance. We observed that 11q-deleted tumors exhibited an inflammatory profile characterized by increased levels of CD8+ T cells, resting CD4+ memory T cells, and tumor-associated macrophages (TAMs), along with heightened immunosuppressive mediators PD-L1, IL10, TGF-ß1, and IDO-1. NB cells consistently polarized macrophages toward an M2 phenotype, promoting tumor proliferation and mesenchymal lineage plasticity. Additionally, we assessed the impact of macrophages on CAR-T cell therapy efficacy, discovering that M2 macrophages impaired PHOX2B CAR-T cell function by downregulating MHC I expression. In contrast, M1 macrophages improved CAR-T efficacy by maintaining or increasing it, enhancing antigen presentation. 11q-deleted HR-NB primary tumors exhibited significant genomic instability, characterized by numerous SCAs. We found a reduced expression of essential DNA damage response genes, including ATM, H2AX, CHEK1, and MRE11A, with no detectable second-hit mutations. Importantly, this reduction was independent of promoter methylation. Furthermore, RASSF1A hypermethylation emerged as a common event in MYCN-amplified and 11q-deleted HR-NB and a negative prognostic marker in these tumors. A specific 52 CpG signature also distinguished 11q-deleted HR-NB from MYCN-amplified subtypes, regulating poor-prognosis genes CSF1R and CCR7, associated with macrophages and lymphocyte recruitment and immune suppression. In conclusion, our findings underscore the pivotal role of TAMs in mediating resistance mechanisms in NB, supporting its targeting as a precision medicine strategy to strengthen antitumor immunity and improve treatment outcomes in high-risk patients.178Reserva de todos los derechosNeuroblastomaTumor MicroenvironmentMacrophagesPrecision MedicineTerapia con células CAR-TCAR-T Cell TherapyInestabilidad genómicaGenomic Instability11q DeletionDNA MethylationMetilación del ADNMHC Class I ExpressionCD8+ T cellsCélulas T CD8+Resting CD4+ memory T cellsCélulas T CD4+ de memoriaTesis doctoral10.4995/Thesis/10251/219958Abierto03.- Garantizar una vida saludable y promover el bienestar para todos y todas en todas las edades09.- Desarrollar infraestructuras resilientes, promover la industrialización inclusiva y sostenible, y fomentar la innovación