Resumen: La hibridación somática, o fusión de protoplastos, es una herramienta biotecnológica aplicable a la mejora de los cítricos. La utilización de esta técnica permite abordar objetivos que sería imposible plantear mediante la hibridación sexual u otras técnicas de mejora, tanto a nivel de mejora de variedades y patrones ya existentes, como para la obtención de nuevos genotipos de interés. El objetivo principal de esta tesis ha sido la aplicación de la hibridación somática a necesidades específicas de la citricultura española. Además se han realizado estudios sobre aspectos técnicos relacionados con la hibridación somática, con el objetivo de facilitar el trabajo de mejora que se realiza aplicando esta técnica. La tesis ha sido dividida en cuatro capítulos y dos apéndices que se describen a continuación. 
El primer capitulo está dirigido hacia la obtención de nuevos patrones de interés utilizando genotipos con características complementarias. Para ello se escogieron los genotipos citrange "Carrizo" y Citrus macrophylla que son dos de los patrones más utilizados en el cultivo de los agrios. Las dificultades encontradas en la obtención de híbridos entre los genotipos seleccionados aplicando los métodos establecidos de fusión química y quimio-eléctrica, hicieron que se buscaran métodos alternativos que pudieran incrementar la eficiencia del proceso. Por esto se adaptó un método de hibridación somática eléctrica que emplea campos de corriente alterna y pulsos de corriente continua. Este nuevo protocolo permitió regenerar, por primera vez, híbridos somáticos simétricos de los parentales comentados. Además se pudo  comparar directamente la eficacia de los tres métodos de fusión de protoplastos disponibles para cítricos, aplicándolos paralelamente a un mismo cruzamiento. 
En el segundo capítulo se muestra la caracterización genética exhaustiva de las plantas obtenidas, tanto a nivel nuclear como a nivel citoplasmático. Los resultados de esta caracterización mostraron que los híbridos somáticos no siempre son la suma perfecta de los dos parentales y que puede haber cambios a nivel cromosómico, subcromosómico o citoplasmático. La aplicación del método eléctrico a otros genotipos permitió así mismo la obtención de híbridos de interés utilizando los genotipos C. taiwanica + C. macrophylla y "Encore" + "Limón rugoso". También estos híbridos fueron caracterizados a nivel nuclear y citoplasmático. 
El tercer capítulo muestra el estudio llevado a cabo del efecto de la radiación con luz UV sobre la integridad del genoma de los protoplastos de cítricos. El interés en la aplicación de este tipo de radiación reside en la posibilidad de obtener híbridos somáticos asimétricos. Se ha estudiado el efecto de la exposición a dosis diferentes de luz UV sobre la viabilidad tanto de protoplastos de callo como de hojas, así como sobre la multiplicación de protoplastos de callo embriogénico. El análisis mediante citometría de flujo de los protoplastos tratados con luz UV ha evidenciado cambios en la estructura del  genoma nuclear. Se ha encontrado una relación directa entre la dosis de luz UV y el grado de fragmentación del ADN observado. Además,  el análisis mediante electroforesis en geles de agarosa ha permitido visualizar la fragmentación que se produce en los protoplastos tratados con luz UV. 
Las variedades pertenecientes al grupo de las clementinas son las más importantes para la citricultura española. Sin embargo en la bibliografía hay descritos sólo unos pocos trabajos de hibridación somática que empleen integrantes de este grupo. La causa principal de este desequilibrio radica en las dificultades encontradas para el aislamiento y purificación de protoplastos a partir de sus hojas aplicando las metodologías empleadas en otros grupos de cítricos. Por ello en el capítulo cuarto se describe la puesta a punto de un protocolo de aislamiento de protoplastos específico para clementinas. Se estudiaron y optimizaron algunas de las variables que afectan al rendimiento en protoplastos aislados, especialmente el estado fisiológico del material vegetal utilizado y las condiciones de aislamiento. 
El protocolo de aislamiento puesto a punto ha permitido obtener de forma rutinaria protoplastos de distintas variedades del grupo de las clementinas, así como de algunos de sus híbridos. Gracias a este protocolo de aislamiento ha sido posible obtener nuevos híbridos somáticos que contienen el genoma de la variedad "Clemenules"(como se describe en el capítulo 5). El híbrido alotetraploide obtenido entre la clementina "Clemenules" y una variedad de satsuma puede ser empleado como parental para realizar hibridaciones interploides y obtener nuevos híbridos triploides. También se obtuvieron cíbridos diploides constituidos por el núcleo de "Clemenules" y el citoplasma de satsuma. Se espera que se haya transferido el carácter de esterilidad masculina (determinado por el citoplasma en las variedades de satsuma) al cíbrido.
Los marcadores microsatélites son una herramienta muy valiosa en la mejora de cítricos porque permiten la identificación varietal, la caracterización de híbridos (sexuales y somáticos), la elaboración de mapas genéticos y la discriminación entre individuos zigóticos y nucelares. Sin embargo no todos los marcadores microsatélite desarrollados son polimórficos para todos los genotipos de cítricos. El apéndice 1 muestra los resultados del estudio de aplicación de la técnica SSCP ("single strand conformation polymorphism") a marcadores SSR. La técnica SSR-SSCP ha permitido detectar polimorfismos en marcadores microstélite tradicionalmente considerados monomórficos.