Selección y caracterización de mutantes en Clementina. Cambios del transcriptoma asociados a la maduración del fruto de los cítricos y análisis de la expresión del gen fosfoenolpiruvato carboxiquinasa

Abstract

La tesis tiene como objetivo central el estudio de la maduración del fruto, proceso fisiológico escasamente conocido a nivel molecular. Para ello se han aislado y caracterizado varias mutaciones de clementino, los cuales han sido empleados para la identificación de rutas bioquímicas y genes importantes en el proceso de maduración. Además, se ha estudiado el proceso de degradación del ácido cítrico en los frutos, centrándose en la función de la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa.

OBJETIVOS 1- Selección y caracterización de nuevos genotipos de Clementina con alteraciones en la maduración interna. 2- Identificación de genes alterados en estos genotipos mediante micromatrices de cDNA específicas de cítricos. 3- Correlación simultánea de los genes alterados en los mutantes con los parámetros de maduración para identificar genes involucrados en el proceso de maduración. 4- Detección de genes delecionados en mutantes irradiados de Clementina mediante CGH y FISH-BAC. 5- Estudio de la degradación de ácido cítrico en los frutos y análisis de la participación en el proceso del gen que codifica para la proteína fosfoenolpiruvato carboxiquinasa.

METODOLOGÍA A DESTACAR: Se han empleado técnicas de biología molecular (hibridación de micromatrices de cDNA, RT-PCR semicuantitativa). La detección de genes delecionados se ha realizado por CGH y FISH-BAC. También se han utilizado técnicas bioquímicas como el suplemento de ácido cítrico frio y marcado con 13C y el análisis de GC-MS.

RESULTADOS LOGRADOS: Se han caracterizado cinco genotipos de Clementina con alteraciones en la maduración. Se han identificado 161 genes implicados en la maduración. Los datos indican que la acumulación de ácido cítrico se relaciona con la inhibición de la ruta GABA mientras que la reducción en acidez depende de la inhibición de la síntesis y metabolismo del citrato. Los resultados sugieren que la degradación de ácido cítrico se produce por la ruta de GABA.