Avanzando hacía la edición genética CRISPR-Cas en lechuga mediante vectores virales

Abstract

[ES] La edición genética CRISPR-Cas ha abierto oportunidades sin precedentes en biotecnología de plantas. Para conseguir edición genética CRISPR-Cas en plantas es necesario expresar dos componentes de la reacción, una nucleasa Cas que cortará el DNA genómico y su RNA guía que la dirigirá a una determinada posición en el genoma. En plantas, debido a la presencia de pared celular, la expresión de estos dos elementos no es trivial y habitualmente requiere la transformación genética estable. Como alternativa, se puede aprovechar la capacidad replicativa y de movimiento sistémico de los vectores virales. El objetivo de este trabajo de fin de máster es obtener algunas herramientas biotecnológicas que faciliten la edición genética CRISPR-Cas en una especie de particular interés agronómico como lechuga. Por un lado, se ha tratado de transformar lechuga para expresar Cas9 de forma estable y, por otro, se ha desarrollado un vector de expresión de RNAs guía derivado del virus X de la lechuga.

[EN] CRISPR-Cas gene editing has opened up unprecedented opportunities in plant biotechnology. To achieve CRISPR-Cas gene editing in plants it is necessary to express two components of the reaction, a Cas nuclease that will cut the genomic DNA and its guide RNA that will direct it to a certain position in the genome. In plants, due to the presence of the cell wall, the expression of these two elements is not trivial and usually requires stable genetic transformation. Alternatively, the replicative and systemic movement capacity of viral vectors can be exploited. The aim of this master's thesis is to obtain some biotechnological tools to facilitate CRISPR-Cas gene editing in a species of particular agronomic interest such as lettuce. On the one hand, we have tried to transform lettuce to stably express Cas9 and, on the other hand, we have developed a vector for the expression of guide RNAs derived from the lettuce X virus.