PRODUCCIÓN DE NANOBODIES EN PLANTAS

Abstract

Este proyecto se encuentra enmarcado en el campo del molecular farming, en el que las plantas se convierten en biofactorias de moléculas específicas, en este caso de mini-anticuerpos de llama (nanobodies o VHHs). Este trabajo busca la expresión en N. benthamiana de diferentes variantes de VHHs frente a la proteína VP6 de rotavirus, usando para ello el sistema de expresión transitoria Magnicon de Icon Genetics. En primer lugar se ensayó la expresión de una VHH denominada 2B3, probando diferentes localizaciones subcelulares. Los resultados se analizaron mediante Western-blot y Coomassie. Viendo que la expresión es posible, se pasó a la búsqueda de nuevas VHHs para su expresión en una misma planta. Se obtuvieron 3 nuevas VHHs, denominadas a1, a3 y b4, que se clonaron y se agroinfiltraron en N. benthamiana, tanto por separado como en conjunto. Para comprobar si tenía lugar la co-expresión simultánea de las 4 VHHs, y dado que poseen diferentes pIs, el resultado se analizó mediante un gel bidimensional. Los resultados obtenidos parecen indicar que es posible co-expresar en una misma planta varios nanobodies de forma simultánea. Además en este punto se procedió a la cuantificación de las VHH, siendo esta de una cantidad de VHH purificada de 41micrag/gFW. Para comprobar la actividad de las diferentes VHHs frente al antígeno VP6 se realizó un test antígeno-ELISA, en el que se obtuvo un resultado positivo con las 4 VHHs. Estos resultados indican que es posible utilizar el sistema Magnifection para la producción de combinaciones de nanobodies en hojas de N. benthamiana.