CONSTRUCCIÓN DE CLONES INFECCIOSOS Y ESTABLES DEL VIRUS DEL GRABADO DEL TABACO (TEV)

Abstract

El virus del grabado del tabaco (TEV) ha sido un modelo en la investigación de muchos aspectos de la biología molecular de virus de RNA en plantas y , más recientemente, en evolución experimental. Sin embargo, el único plásmido con un clon infeccioso de este virus (pTEV7DA) es inestable cuando se propaga en Escherichia coli. En este trabajo el clon infeccioso del TEV contenido en pTEV7DA se usó para la construcción de tres nuevos plásmidos que permiten infectar plantas con transcritos de RNA sintetizados in vitro (pMTEV), con DNA plasmídico (p35TEV) y por agroinoculación (pGTEV).Para aumentar la estabilidad de dichos plásmidos en E. coli se eliminaron secuencias consideradas irrelevantes y el casete de expresión del virus se insertó entre el origen de replicación del plásmido y el marcador de selección en orientación contraria a este último. Aunque el cDNA del TEV en los tres plásmidos no esta interrumpido, estos son más estables que pTEV7DA durante su propagación en E. coli, indicando una gran influencia del contexto del plásmido en la estabilidad de dicho cDNA viral. Usando los distintos inóculos que se producen a partir de los nuevos plásmidos , se comparó la infectividad del TEV. Los resultados mostraron que la agroinoculación es el método de inoculación más efectivo y en el que los síntomas aparecen antes.