EFFECT OF DONOR STRAIN AND MATURATION STAGE OF RABBIT OOCYTES ON RESULTS OF PENETRATION TEST OF RABBIT SEMEN

Abstract

[EN] The objective of this work was to develop a homologous in vitre penetration test to evaluate !he behaviour of rabbit sperm. Three treatments were applied to sperm (fresh, treated with heparin and frozen with a DMSO-sucrose extender), and two types of oocytes (immature or in vitre matured) belonging to tour different rabbit lines were used. The test was performed in TCM-199, under the following conditions: 37°C, 5% C02 and saturated humidi!y for 6 hours. After incubation, oocytes were denuded and they were observad under rnicroscope to record the nurnber of sperrnatozoa/oocyte. Results obtained showed significan! differences between ali !he treatments of sperm in the percentage of oocytes with adhered sperrnatozoa (80%, 57%, 28% oocytes with adhered spermatozoa for fresh, treated with heparin and frozen semen, respectively, P<0.05). At !he same time, larger number of sperm/penetrated oocyte were observad for fresh semen !han for !he other treatments (21.3± 3. 7, 3.9 ± 0.6 and 2.3 ± 0.2 sperm/oocyte for fresh, treated with heparin and frozen semen, respectively, P<0.01 ). The resistance of fresh semen to !he incubation conditions was higher !han that of frozen or treated with heparin semen, which could determine the differences observed between thern in the results of !he test. From the results obtained, it could be concluded that immature oocytes could be used to evaluate !he behaviour of rabbit sperm, since even fresh semen were capable to ad he re to !he surface of these oocytes; on !he other hand, further studies are necessary to improve the resistance a! the incubation conditions of frozen semen, which will probably perrnit to predict its fertility in vivo.

[FR] L'objectif de ce travail était de développer un test in vitro homologue de pénétration des oocytes, pour évaluer le comportement des spermatoza·ides de lapins. Trois traitements ont été appliqués sur la semence (fraiche, traitée avec de l'héparine, ou congelée avec un dilueur contenant du DMSO et du sucrose) et 2 types d'oocytes (immatures ou maturés in vitro) appartenaient a 4 lignées différentes. Le test a été réalisé dans du TCM-199 dans les · conditions suivantes : 37°C, 5% de C02, atmosphére saturée en humidité pendan! 6 heures). Aprés incubation, les oocytes ont été dénudés et observés sous un microscope pour enregistrer le nombre de spermatozordes par oocyte. Les résultats obtenus mettent en évidence des différences significatives entre tous les traitements de la semence sur le pourcentage d'oocytes présentant des spermatozordes accolés (80%, 57% et 28 %, respectivement pour la semence fraiche, traitée avec l'héparine ou congelée, p<0.05). En méme temps, un plus grand nombre de spermatozo·ides/ oocyte pénétré est observé pour la semence fraiche comparé aux autres traitements (21.3± 3. 7 vs 3.9 ± 0.6 et 2.3 ± 0.2 spermatozo"ides/oocytes respectivement pour la semen ce fraTche, traitée avec l'héparine ou congelé p<0.01 ). Une meilleure résistance de la semence fraiche aux conditions d'incubation pourrait expliquer les différences obtenues. On peut conclure que les oocytes immatures peuvent étre utilisés pour évaluer le comportement des spermatozordes de lapins, puisque méme les spermatozo"ides éjaculés sont capables d'adhérer a la surface des oocytes. Cependant, de nouvelles études seront nécessaires pour améliorer la résistance des spermatozo'ides aux conditions d'incubation de la semence préalablement congelée, afin de prédire la fertilité in vivo.