Etiquetado de proteínas del virus del grabado del tabaco

Abstract

Los virus que infectan plantas ocasionan pérdidas importantes en agricultura. Las soluciones que la biotecnología pueda ofrecer necesitan de un conocimiento profundo de la biología molecular de estos patógenos. Obtener información sobre la función de las proteínas expresadas por su genoma y la forma en que interactúan con su hospedador es clave para el desarrollo de estrategias de control de las enfermedades causadas por virus. Un virus modelo muy comúnmente empleado en investigación es el virus del grabado del tabaco (TEV). En este trabajo se construyó una colección de clones del TEV etiquetados cada uno en uno de los cistrones de su genoma. De estos clones se evaluó su viabilidad al ser inoculados en plantas de tabaco y la estabilidad de la etiqueta al amplificarse el virus durante el proceso de infección. Se analizó asimismo su utilidad para purificar la proteína viral etiquetada y los factores del huésped que interactúan con ella in vivo. Se pretendía determinar en qué localizaciones del genoma del TEV es posible introducir una etiqueta de forma estable y sin alterar la infectividad. El objetivo último fue desarrollar una herramienta para la identificación de interacciones entre las proteínas virales y los factores del huésped. Los resultados desvelaron que al menos en 4 cistrones del genoma del TEV (P1, HC-Pro, NIb y CP) es posible la introducción de etiquetas sin afectar a la infectividad del clon viral y de forma estable. La purificación de la proteína viral etiquetada NIb fue llevada a cabo de forma exitosa a partir de tejido vegetal infectado por el clon viral etiquetado en tal posición. Junto a ella se purificaron otras proteínas que se encontraban interactuando in vivo con NIb, algunas virales y otras del hospedador. Estos factores de la planta son clave para el desarrollo de estrategias de mejora de la resistencia a patógenos virales.