Efecto del cultivo in vitro y de la vitrificación de embriones en la supervivencia y desarrollo prenatal y crecimiento postnatal en el conejo

Abstract

El uso de técnicas de reproducción asistida tanto en medicina humana, como respuesta a los problemas de fertilidad, como en animales, como forma de difusión de la mejora genética y preservación de recursos genéticos, ha aumentado a lo largo de los últimos años. Sin embargo, dado que éstas se aplican durante el desarrollo embrionario temprano y que éste es un periodo sensiblemente crítico, el ambiente, los medios y las técnicas utilizadas pueden provocar alteraciones en el desarrollo que podrían dejar una huella permanente en el individuo concebido. Los objetivos del trabajo han sido estudiar el efecto del cultivo in vitro y la vitrificación de embriones en diferentes estadíos sobre su supervivencia prenatal y desarrollo prenatal y postnatal. El cultivo embrionario se realizó en medio M199 y se utilizó un protocolo de vitrificación en dos pasos en la adición de crioprotectores (20 y 40% (v/v) etilenglicol y 18% (p/v) Ficoll) y con Cryotop como soporte de vitrificación. El trabajo se dividió en tres bloques experimentales: efecto del cultivo de embriones de 24 horas, efecto del cultivo y vitrificación de embriones de 48 horas y efecto del cultivo y vitrificación de embriones de 76 horas. Se transfirieron un total de 1.031 embriones procedentes de donantes superovuladas y se realizaron un total de 50 transferencias. Tanto el cultivo como la vitrificación indujeron un retraso en el desarrollo embrionario temprano que tuvo como resultado una reducción de las tasa de supervivencia embrionaria y fetal, más importante cuanto más temprano fue el estadío de desarrollo del embrión utilizado. El desarrollo prenatal monitorizado por ecografía a lo largo de la gestación permitió observar un retraso en el crecimiento fetal y de las placentas fetal y materna que fue compensado a partir del día 21 de gestación para los embriones cultivados de 24 horas, los vitrificados de 48 horas y los cultivados y vitrificados de 48 horas. Por contra, la vitrificación de embriones de 76 horas no alteró el crecimiento del feto ni de las placentas a lo largo de la gestación. Los gazapos provenientes del grupo de embriones vitrificados y cultivados de 48 horas mostraron un mayor peso a las nueve semanas. Sin embargo, no se observó ninguna alteración en el desarrollo postnatal debida al efecto del cultivo de embriones de 24 horas o al efecto del cultivo y vitrificación de embriones de 76 horas.

The use of assisted reproduction techniques in human medicine, as a response to fertility problems, as well as in animals, as a means of disseminating genetic improvement and preservation of genetic resources, has increased over recent years. However, given that these are applied during early embryonic development and that this is a period that is sensibly critical, the environment, means and techniques used can cause alterations in development that could leave a permanent mark on the individual conceived. The objectives of this study had been to evaluate the effects of in vitro culture and vitrification at different embryo stages on prenatal survival and prenatal and postnatal development. M199 medium was used for embryo culture and a vitrification two-step procedure was used in in the addition of cryoprotectants (20 and 40% (v/v), ethylene glycol and 18% (w/v) Ficoll) in Cryotop device. The study was divided into three experimental blocks: 24-hour embryo culture effect, 48-hour embryo culture and vitrification effect and 76-hour embryo culture and vitrification effect. A total of 1031 embryos from superovulated donors were transferred and a total of 50 transfers were made. Both culture and vitrification induced a delay in early embryonic development that resulted in lower embryonic and fetal survival rates, more apparent as earliest embryo development-stages were used. Prenatal development monitored by ultrasound scanning throughout pregnancy allowed to observe a delay in fetal and maternal placenta and fetal growth in 24-hour and 48-hour embryo cultured, and 48-hour embryo cultured and vitrified that were compensated from day 21. In contrast, vitrification of 76-hour embryos did not alter fetus or placentas growth throughout the gestation. Nine-week kits from 48-hour embryo vitrified and cultured group showed a greater body weight. However, no alteration in postnatal development caused by 24-hour embryo culture or 76-hour embryo culture and vitrification was observed.