Identificación de hongos patógenos asociados a enfermedades de la madera de la vid en Piura (Perú)

Abstract

[ES] Los hongos de la madera causan graves problemas tanto en plantas jóvenes como adultas de variedades de uva de mesa en Perú. Los síntomas más comunes que presentan las plantas afectadas son; un crecimiento débil, clorosis internervial, necrosis en la madera y marchitez de las hojas, que pueden acabar con la muerte de la parte afectada o de la totalidad la planta. Se muestrearon plantas sintomáticas de campo y vivero en la región de Piura, en el norte de Perú, de las cuales se obtuvieron aislados fúngicos en medio de cultivo PDAS. Las colonias se harán crecer en medio de cultivo PDA para su desarrollo y posible producción de esporas. Se prepararán cultivos monospóricos o monihifales para asegurar la uniformidad genética de los cultivos. Para su identificación se realizará un estudio morfológico del aspecto de las colonias y de las esporas en medio de cultivo PDA (para aislados pertenecientes al género Phaeoacremonium) y en medio de cultivo agar agua con la adición de acículas de pino estériles (para los aislados pertenecientes a la familia Botryosphaeriaceae). Para la identificación molecular, se extraerá el ADN de los cultivos crecidos en PDA usando el KIT de E.Z.N.A y se secuenciarán el segmento del gen de la β-tubulina (TUB 2) usando los cebadores T1 (5¿AAC ATG CGT GAG ATT GTA AGT 3¿) y BT2B (5¿ACC CTC AGT GTA GTG ACC CTT GGC 3¿) para Phaeoacremonium y el segmento del gen del factor de elongación 1-α (EF1- α ) usando los cebadores EF1F (5¿ TGC GGT GGT ATC GAC AAG CGT 3¿) y EF2R (5¿ AGC ATG TTG TCG CCG TTG AAG 3¿) para Botryosphaeriaceae.

[EN] Pathogenic fungi associated with grapevine trunk diseases cause severe problems in young and adult plants of different table grape varieties in Peru. The most common symptoms present in affected plants are: stunted growth, interveinal chlorosis, wood-necrosis and wilt leaves, than can lead to the death of the affected part of the plant or the total plant. Symptomatic plants from nursery and field were sampled in Piura region (Peru). Pathogenic fungi were obtained in PDAS culture medium. The colonies will be growth in PDA culture medium for its development and possible spore production. Monosporic and hyphal tipped cultures will be prepared to ensure their genetic uniformity. For their identification a morphological study will be performed to observe the aspect of the colonies and their spores in PDA culture medium (in case of the Phaeoacremonium isolates) and in Water Agar culture medium with sterile pine needles (in case of Botryosphaeriaceae isolates). Regarding molecular identification, DNA from the growth cultures will be extracted using E.Z.N.A. kit. A fragment of the β-tubulin gene (tub2) will be sequenced in case of the isolates belonging to Phaeoacremonium genus, using the primers T1 (5¿AAC ATG CGT GAG ATT GTA AGT 3¿) and BT2b (5¿ACC CTC AGT GTA GTG ACC CTT GGC 3¿) and, a fragment of the elongation factor 1-alpha gene (tef1-α) will be sequenced for the isolates belonging to Botryosphaeriaceae family, using the primers EF1F (5¿ TGC GGT GGT ATC GAC AAG CGT 3¿) and EF2R (5¿ AGC ATG TTG TCG CCG TTG AAG 3¿).