IMPLEMENTACIÓN DE LA TECNOLOGÍA DE SECUENCIACIÓN MASIVA AL DIAGNÓSTICO MOLECULAR DEL CÁNCER COLORECTAL METASTÁTICO

Abstract

El cáncer colorrectal metastático (CCRm) constituye un gran ejemplo de la medicina personalizada dado que resulta necesario el estudio de biomarcadores moleculares en el momento del diagnóstico de la enfermedad, con el objetivo de determinar el esquema de tratamiento más adecuado para cada paciente. Concretamente, las mutaciones en KRAS y NRAS constituyen biomarcadores predictivos de resistencia primaria a la terapia con anticuerpos monoclonales anti-EGFR (Cetuximab y Panitumumab) mientras que la mutación V600E en el gen BRAF se asocia a un mal pronóstico en estos pacientes. En la actualidad, tanto la Agencia de Alimentos y Medicamentos estadounidense (FDA) como la Agencia Europea de Medicamentos (EMA) consideran mandatorio el estudio mutacional de los exones 2 (codones 12 y 13), 3 (codones 59 y 61) y 4 (codones 117 y 146) de KRAS y NRAS previo a la administración de tratamiento anti-EGFR ya que únicamente debe administrarse en ausencia de mutaciones en estos genes. En el laboratorio clínico, para el estudio mutacional sobre ADN genómico obtenido de tejido tumoral fijado en formaldehído e incluido en parafina (FFPE) se emplean, principalmente, diferentes aproximaciones de gen único basadas en la PCR en tiempo real (RT-PCR). No obstante, el desarrollo de tecnologías de última generación como la secuenciación masiva (NGS) ofrece la oportunidad de abordar el estudio mutacional de estos genes de manera simultánea en una misma plataforma permitiendo además, una caracterización más exhaustiva del perfil molecular de los tumores con un menor consumo de muestra.

Metastatic colorectal cancer (mCRC) is a great example of "personalized medicine" since it is necessary to study molecular biomarkers at the diagnosis of the disease, in order to determine the most appropriate treatment scheme for each patient. Specifically, mutations in KRAS and NRAS are predictive biomarkers of primary resistance to therapy with anti-EGFR monoclonal antibodies (Cetuximab and Panitumumab) while the V600E mutation in the BRAF gene is associated with a poor prognosis. Nowadays, both the US Food and Drug Administration (FDA) and the European Medicines Agency (EMA) consider mandatory the mutational study of exons 2 (codons 12 and 13), 3 (codons 59 and 61) and 4 (codons 117 and 146) of KRAS and NRAS prior to the administration of anti-EGFR. This treatment should only be administered in the absence of mutations in these genes. In molecular diagnostics laboratory, for the mutational study on genomic DNA obtained from formalin-fixed paraffin embedded (FFPE) tissue, different "single gene" approaches are used, based on real-time PCR (RT-PCR). However, the development of new technologies such as next generation sequencing (NGS) offers the opportunity to address the mutational study of these genes simultaneously in the same platform, also allowing a more exhaustive characterization of the molecular profile of tumors with lower sample consumption.