Screening mutacional mediante NGS en pacientes con hipoacusia

Abstract

[ES] La pérdida de audición es uno de los defectos sensoriales en humanos con más prevalencia. En los países desarrollados la mayoría de los casos de pérdida auditiva congénita (Non syndromic sensorineural hearing loss NSHL) son de causa genética. Actualmente existen más de 80 genes relacionados con sordera, por lo que presenta una gran heterogeneidad genética. En este estudio aplicamos un panel de secuenciación por Next Generation Sequencing (NGS) que contiene los 45 genes más prevalentes causantes de NSHL para el análisis mediante secuenciación masiva de muestras de ADN de los pacientes, extraídas a partir de sangre periférica. Una vez analizados los datos obtenidos, comprobamos mediante secuenciación Sanger las mutaciones de los pacientes con el fin de confirmarlas. Solo realizamos este paso con las mutaciones que son patológicas o posiblemente patológicas que puedan ser la causa de la sordera en el paciente. Además, analizamos si hay variantes en el número de copias (CNVs) en los pacientes ya que estas también pueden ser responsables de la NSHL, pues alteran el estado diploide de parte del genoma aumentando o disminuyendo el número de alelos. Viendo los resultados del análisis, si sospechamos que hay alguna variación en el número de copias para algún gen de los que estamos estudiando, haremos el análisis con MLPA. De esta manera, se puede detectar una variación en el número de copias para un determinado exón de un determinado gen. Finalmente, realizaremos un informe con los resultados del análisis para informar al paciente sobre qué mutación de qué gen está causando su sordera. Además, si el paciente desea tener descendencia, se le ofrecerá consejo genético.

[EN] Hearing loss is one of the most prevalent sensory defects in humans. In developed countries, most cases of Non-Syndromic Sensorineural Hearing Loss (NSHS) are due to a genetic cause. Nowadays, there are more than 80 genes identified related to deafness, so it has a huge genetic heterogeneity. In this study we applied a Next Generation Sequencing (NGS) panel that contains 45 of the most prevalent genes which cause NSHL for the analysis of the patients. For this purpose, we used DNA samples extracted from peripheral blood. Once we analyzed the obtained data, we verified the patient s mutations by Sanger sequencing in order to confirm them. We only do this with the mutations that are pathological or possibly pathological and that may be the cause of the patient s deafness. In addition, we analyze if there are Copy Number Variants (CNVs) because these may also be responsible for the NSHL, since they alter the diploid state of part of the genome by increasing or decreasing the number of alleles. When we obtain the results of this analysis, if we suspect there are variations in the number of copies in some of the genes we are studying, we will do an MLPA analysis. This way, we can detect variations in the number of copies for a given exon of a certain gene. Finally, we will write an inform which contains the results of the analysis in order to inform the patient about which mutation and which gene is causing the deafness. Moreover, if the patient would like to have offspring, we will provide him genetic counseling.