Análisis de la integridad del DNA libre circulante en orina como biomarcador diagnóstico de cáncer vesical.

Abstract

[ES] El cáncer de vejiga es el noveno cáncer más común en el mundo, ocupando el puesto 13 con respecto a la mortalidad por cáncer al año. Los métodos de diagnóstico disponibles incluyen tomografía computarizada (TC), resonancia magnética o PET (tomografía por emisión de positrones), que implica una alta radiación para el paciente. Dado que no existen métodos no invasivos para diagnosticar tumores urológicos como el cáncer de vejiga, la búsqueda de nuevos biomarcadores de diagnóstico que permitan monitorizar la enfermedad y predecir la respuesta de la terapia o la resistencia sin intervención invasiva y que además sean económicos y fáciles de detectar es extremadamente necesaria. Las biopsias líquidas tienen el potencial de llenar este vacío, ya que la obtención de muestras es sencilla y mínimamente invasiva. El ADN libre circulante (cfDNA) proviene de células que han muerto, ya sea por apoptosis o por necrosis. En el ambiente tumoral, se produce una mayor proporción de muerte por necrosis que por apoptosis, es decir, se produce principalmente una muerte celular no programada. El resultado de esos diferentes tipos de muerte causa un grado de fragmentación diferente del ADN y el grado de integridad podría representar un biomarcador diagnóstico-pronóstico para diferentes tumores urológicos. En este estudio nos centramos en el cáncer de vejiga, y para ese propósito seleccionamos 83 individuos, 63 pacientes con cáncer vesical en diferentes estadios y 20 controles sanos, pareados por edad y sexo. De cada paciente recolectamos 3 muestras de orina diferentes: antes de la cistectomía, tres meses después y al año después de la cirugía. De los controles recogimos una muestra de orina. En este estudio analizamos la integridad del DNA presente en la orina de los pacientes antes de la cistectomía y lo comparamos con el de los controles sanos. Aislamos el cfDNA de la orina y cuantificamos el nivel de expresión de fragmentos grandes y pequeños de 5 genes, ACTB, BCAS1, STOX1, c-MYC y AR por PCR cuantitativa en tiempo real.

[EN] Bladder cancer is the 9th most common cancer in the world, ranking 13th regarding mortality per year. The available diagnostic methods include computed tomography (CT) scan, magnetic resonance imaging (MRI) or positron emission tomography (PET) scan, which involves high radiation radiation for the patient. Given that non-invasive methods to diagnose urologic tumours such as bladder cancer are not available, the search for new, realiable and non- expensive diagnostic biomarkers that allow monitoring the disease and predict response to therapy or resistance without invasive intervention is of paramount importance. Liquid biopsies have the potential to fill this gap, since sampling is easy and minimally invasive. Circulating cell-free DNA (cfDNA) comes from cells that have died, either by apoptosis or by necrosis. In the tumor environment, a greater proportion of cells die by necrosis than by apoptosis thus, a non-programmed cell death mainly occurs. Each type of death causes a different degree of DNA fragmentation and the degree of integrity could represent a diagnostic-prognostic biomarker for different urological tumors. In this study we focused on bladder cancer, and for that purpose we selected 83 individuals, 63 patients with bladder cancer at different stages and 20 healthy controls, matched by age and sex. From each patient we collected 3 different urine samples: before the cystectomy, three months after and one year after the surgery. We collected a urine sample from controls. In this study, we analyzed the integrity of urine DNA of patients before the cystectomy and compared it with that of healthy controls. We isolated the urine cfDNA and quantified the expression level of large and small fragments of 5 genes, ACTB, BCAS1, STOX1, c-MYC and AR by quantitative real-time PCR.