ANALYTICAL METHOD VALIDATION FOR THE QUANTIFICATION OF BRODIFACOUM IN THE TEST ITEM I-BITE, BLOCK BAIT (BRODIFACOUM 0.0025% W/W A.1.)

Abstract

[EN] The purpose of the study is the validation of a HPLC-DAD method for identifying and quantifying Brodifacoum in a pure standard sample according to SANCO/3030/99 guideline. Brodifacoum is an anticoagulant that reduces blood coagulation ability and it is commonly used for control of rats and mice. In order to validate this method, parameters such as specificity, linearity, accuracy and precision are investigated. Two different methods, isocratic elution and gradient elution, are carry out in order to get a better precision. After the validation of the method, the raw material is extracted from real samples and quantified. Finally, the efficiency of the extraction is tested. The identification of Brodifacoum is being performed by HPLC-DAD analysis, comparing the retention time and the shape of the peak of the reference standard with those of the active ingredient in the test sample. The specificity is tested and it confirms the identity of the compound and provide that there are no interferences. Linearity is also proved since the linear regression coefficient of the line is higher than 0.99, fitting perfectly to a straight line in the working area. Precision is evaluated analysing the RSD% coefficient, the average and the standard deviation of the peaks. Finally, accuracy is related with the recovery of Brodifacoum in the spike sample. For isocratic method, recovery is 96% and for gradient method it is 105%, high values which are also within the range of the guideline. Therefore, the method has been proved to be specific, linear, precise and accurate.

[ES] El objetivo del estudio es validar, de acuerdo con la directriz SANCO/3030/99, un método HPLC-DAD capaz de identificar y cuantificar Brodifacoum en el artículo de prueba "I-Bite, cebo en bloque (brodifacoum 0,0025% p/p a.i.). Para poder validar dicho método, se investigan los siguientes parámetros: - Especificidad: es necesario confirmar la identidad del compuesto y comprobar que no hay interferencias > 3%, tal como exigen las directrices SANCO/3030/99 rev. 5. La especificidad representa la capacidad del método para estimar inequívocamente el analito en presencia de los demás componentes del producto final. - Linealidad: la linealidad de un procedimiento analítico es su capacidad (dentro de un intervalo determinado) para obtener resultados de ensayo directamente proporcionales a la concentración del analito en la muestra. - Exactitud: la exactitud del procedimiento analítico expresa la concordancia entre el valor que se acepta como valor verdadero convencional y el valor hallado con el método aplicado. - Precisión: se refiere a la concordancia entre los resultados de ensayos independientes obtenidos con el mismo método e idéntico material de ensayo en el mismo laboratorio, por el mismo operario y con el mismo equipo, en intervalos cortos de tiempo. El patrocinador proporciona la materia prima certificada, la solución placebo y el producto de ensayo. La materia prima se utiliza como patrón de referencia para la identificación y cuantificación del principio activo Brodifacoum. La identificación del Brodifacoum se está realizando mediante análisis HPLC-DAD, comparando el tiempo de retención y la forma del pico del estándar de referencia con los del principio activo en la muestra problema. También se han adquirido y comparan los espectros de absorción.