Development of an Artificial Recombination Test System Under High Selection Pressure for Beet- Infecting Poleroviruses

Abstract

[ES] El virus de la clorosis de la remolacha (BChV) y el virus del amarillamiento leve de la remolacha (BMYV) son especies estrechamente relacionadas del género Polerovirus, transmitidas por áfidos, y forman parte del complejo de la enfermedad del amarillamiento del virus en especies de plantas del género Beta. Aunque con frecuencia se detectan juntos en infecciones mixtas, estos dos virus tienen distintos rangos de hospedantes. Los recombinantes naturales BMYV y BChV ya estaban documentados y, en el contexto de la estrategia de expresión genómica altamente compleja de los polerovirus, el sistema de recombinación potencial de estas especies podría convertirse en una valiosa herramienta de investigación. Se han desarrollado sistemas de recombinación para otros virus, como el Potato virus X, pero no para los polerovirus. En este trabajo, se desarrolló un sistema de recombinación artificial bajo alta presión de selección para polerovirus que infectan a la remolacha mediante la clonación de un genoma viral parcial en el vector binario utilizando el ensamblaje de Gibson. Se realizó un ensayo in planta mediante inoculación mediada por Agrobacterium de Nicotiana benthamiana para probar la viabilidad del sistema.

[EN] Beet chlorosis virus (BChV) and beet mild yellowing virus (BMYV) are closely related species of the genus Polerovirus, transmitted by aphids and are a part of the virus yellows disease complex in genus Beta species. Although frequently detected together in mixed infections, these two viruses have distinct host ranges. BMYV and BChV natural recombinants were already documented, and in the context of the highly complex genome expression strategy of poleroviruses, the potential recombination system of these species could become a valuable research tool. Recombination systems have been developed for other viruses, such as Potato virus X, but not for poleroviruses. In this work, an artificial recombination system under high selection pressure for beet-infecting poleroviruses was developed by cloning a partial virus genome into the binary vector using Gibson assembly. In planta assay by means of Agrobacterium mediated inoculation of Nicotiana benthamiana was done to test the system's viability.