Detección de virus y fitoplasmas en árboles ornamentales en el Jardín de Viveros de Valencia

Abstract

[ES] En noviembre de 2021 el Ayuntamiento de Valencia se puso en contacto con la Unidad de Patología Vegetal de la Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural de la Universitat Politècnica de València, al observar una serie de ejemplares de Pinus halepensis con síntomas de secado más o menos generalizado, o de alguna de sus ramas, ubicados en los Jardines del Real-Viveros de la ciudad de Valencia. Además, también en otras zonas de estos jardines se observaron árboles de Celtis australis y Olea europaea con apuntado de hojas y amarilleo internervial, respectivamente. Se muestrearon un total de 27 muestras de diferentes ramas afectadas de pino carrasco (P. halepensis) de cinco ejemplares. Asimismo, se tomaron 18 muestras de olivo (O. europaea) con síntomas de amarilleo internervial y asintomáticas y 19 muestras de hojas de almez (C. australis) con filiformismo. Posteriormente, tras la extracción de ácidos nucleicos, se realizó una Nested PCR con cebadores universales de fitoplasmas (16S rRNA) para la detección de Candidatus Phytoplasma pini en muestras P. halepensis y RT-PCR con cebadores específicos de proteína de cubierta para la detección del virus olive leaf yellowing associated virus (OLYaV) en O. europaea. Las muestras seleccionadas de C. australis se analizaron mediante test DAS-ELISA (Double Antibody Sandwich-Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) para la detección del virus del mosaico del pepino (cucumber mosaic virus, CMV) y mediante nested-PCR para la detección de fitoplasmas. Ninguna de las muestras de pino, ni las de almez resultaron positivas a fitoplasmas. En el caso del almez tampoco se detectó CMV en ninguna de las muestras. Sin embargo, 10 de las 18 muestras de olivo fueron positivas a OLYaV al ser analizadas mediante RT-PCR con cebadores específicos. Todas las muestras con síntomas de amarilleo internervial fueron positivas a OLYaV, y además 5 muestras asintomáticas también resultaron estar infectadas con el virus. En tres de las muestras, se procedió a secuenciar los fragmentos obtenidos en la RT-PCR y a realizar el análisis BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) de las secuencias obtenidas revelando que las muestras estaban infectadas con un aislado de OLYaV que presentaba una identidad nucleotídica de más del 90% con un aislado procedente de Brasil recogido en 2019 en olivo con número de accesión MT809205.1. de la base de datos del GenBank del NCBI (National Center for Biotechnology Information).

[EN] In November 2021, the Valencia City Council contacted the Plant Pathology Unit of the Higher Technical School of Agricultural Engineering and the Natural Environment of the Polytechnic University of Valencia, after observing a series of specimens of Pinus halepensis with symptoms of more or less generalized drying, or of some of its branches, located in the Jardines del Real-Viveros of the city of Valencia. In addition, in other areas of these gardens, Celtis australis and Olea europaea trees were also observed with leaf pointing and interveinal yellowing, respectively. A total of 27 samples of different affected branches of Aleppo pine (P. halepensis) from five specimens were sampled. Likewise, 18 samples of olive trees (O. europaea) with symptoms of interveinal yellowing and asymptomatic and 19 samples of hackberry leaves (C. australis) with filiformism were taken. Subsequently, after nucleic acid extraction, a Nested PCR was performed with universal phytoplasma primers (16S rRNA) for the detection of Candidatus Phytoplasma pini in P. halepensis samples and RT-PCR with specific coat protein primers for the detection of the olive leaf yellowing associated virus (OLYaV) in O. europaea. The selected C. australis samples were analyzed by DAS-ELISA (Double Antibody Sandwich-Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) test for the detection of cucumber mosaic virus (CMV) and by nested-PCR for the detection of phytoplasmas. None of the pine or hackberry samples tested positive for phytoplasmas. In the case of hackberry, CMV was not detected in any of the samples either. However, 10 of the 18 olive samples tested positive for OLYaV when analysed by RT-PCR with specific primers. All samples with interveinal yellowing symptoms tested positive for OLYaV, and 5 asymptomatic samples were also found to be infected with the virus. In three of the samples, the fragments obtained in the RT-PCR were sequenced and BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) analysis of the sequences obtained was performed, revealing that the samples were infected with an OLYaV isolate that had a nucleotide identity of more than 90% with an isolate from Brazil collected in 2019 in olive trees with accession number MT809205.1. from the NCBI (National Center for Biotechnology Information) GenBank database.