Estudio del perfil oxidativo en fibroblastos nih3t3 con la actividad proteasomal inhibida y en fibroblastos de pacientes con la enfermedad de lafora

Abstract

[ES] Tioredoxina 1 (Trx1) es una disulfito reductasa localizada en el citoplasma y también el núcleo. Trx1 está relacionada con distintos procesos celulares como apoptosis, síntesis de desoxiribunucleótidos, transporte de electrones, actividad antioxidante y regulación de varios factores de transcripción. Proteasoma es responsable de la degradación selectiva de la mayoría de proteínas nucleares y citosólicas marcadas para degradación, además de controlar el ciclo celular, la transcripción y la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) en el retículo endoplásmico. La enfermedad de Lafora es una enfermedad rara (ORPHA501) caracterizada por una epilepsia mioclónica progresiva. Han sido identificados dos genes afectados en pacientes de Lafora: EPM2A que codifica para una fosfatasa denominada laforina y EPM2B que codifica para una E3 ubiquitina-ligasa. Este trabajo se centra por un lado en el estudio en fibroblastos NIH3T3 de la expresión y localización de Trx1 con la proliferación celular y tras la inhibición de la actividad proteasomal con MG132 a dosis infratóxicas. Por otro lado se estudio la expresión y localización de Trx1 en fibroblastos procedentes de pacientes con la Enfermedad de Lafora. Finalmente se estudió la posible interacción de Trx1 y proteasoma en ambas líneas celulares

[EN] Thioredoxin 1 (Trx1) is a disulfide reductase localized in the cytoplasm and also in the nucleus. Trx1 has been involved in distinct cellular processes such as apoptosis, synthesis of deoxyribonucleotides, electron transport, antioxidant activity and regulation of many transcription factors. Proteasome is responsible for the selective degradation of the majority of marked for destruction nuclear and cytosolic proteins and it also controls cell-cycle progression, regulates the transcription and the unfolded protein response (UPR) at the endoplasmic reticulum. Lafora¿s disease (LD) is a rare disease (ORPHA501) characterized by progressive myoclonus epilepsy. Two genes have been identified in LD patients: EPM2A encoding a phosphatase called laforin and EPM2B encoding an E3 ubiquitin ligase named malin. In this work we study on one hand the expression and locatization of Trx1 during cell proliferation and after proteasomal inhibition with MG132 at subletal dosis in NIH3T3 fibroblasts. On the other hand we study the expression and localization of Trx1 in fibroblasts from Lafora pacients. Finally we study the interaction of Trx1 and proteasome in both cell lines.