Evaluación de la técnica basada en inmunoensayo con microesferas magnéticas (Luminex®) para medición simultánea de varias citoquinas en plasma humano, y comparativa con la metodología estándar (ELISA)

Abstract

[EN] Immunoassays are normally used in order to measure cytokines in patients samples. Among them, ELISA is the standard technique, though the novel Luminex® xMAP® technology is more suitable for the new molecular biology approaches. In this project both technologies were compared for cytokines measurement in HCV-infected patients plasmas. Two cytokines were mainly studied: TNFα and IFNγ. Apart from this comparison, the parameters for optimizing ELISA assays were analysed: standard curve fitting, correction wavelength, used lector and measurement time. Valid conclusions were obtained with TNFα, but not with IFNγ. Also, intra-assay and inter-assay variabilities were compared, as well as the results obtained for TNFα with a High Sensitivity kit and a standard one. Finally, though the Luminex® results were not as expected, we can assure that they are not comparable with ELISA results for our samples. ELISA High Sensitivity kits are more convenient for them. Therefore, the results from this project are useful for selecting the optimum methodology in order to measure low concentrations of cytokines in plasma samples.

[ES] Los inmunoensayos son la metodología utilizada para medición de citoquinas en muestras de pacientes. Entre ellos, ELISA es la técnica estándar, aunque la tecnología xMAP® de Luminex® es novedosa y resulta conveniente para los nuevos abordajes de biología molecular. En este proyecto ambas técnicas fueron comparadas para la medición de citoquinas en plasma de pacientes infectados con Virus de Hepatitis C. Se estudiaron principalmente dos citoquinas: TNFα e IFNγ. Además de la comparación de ambos métodos, se analizaron los parámetros para optimizar los ensayos ELISA llevados a cabo en el grupo: ajuste de la curva estándar, longitud de onda de corrección, lector empleado y tiempo de medición. Se obtuvieron conclusiones válidas respecto a TNFα, pero no fue así para IFNγ. Asimismo, también se analizaron las variabilidades intraensayo e interensayo, y se contrastaron los resultados obtenidos para TNFα con un kit de alta sensibilidad y otro estándar. Finalmente, aunque los resultados obtenidos con Luminex® no fueron los deseados, sirvieron para determinar que, al menos en el caso de nuestras muestras, no resultan equivalentes a los obtenidos con ELISA. Para el tipo de muestras con el que trabaja el grupo resulta conveniente emplear kits de alta sensibilidad de ELISA. Por tanto, los resultados de este trabajo resultan de interés para la elección de una metodología óptima para analizar bajas concentraciones de citoquinas en plasma. Immunoassays are normally used in order to measure cytokines in patients samples. Among them, ELISA is the standard technique, though the novel Luminex® xMAP® technology is more suitable for the new molecular biology approaches. In this project both technologies were compared for cytokines measurement in HCV-infected patients plasmas. Two cytokines were mainly studied: TNFα and IFNγ.