Caracterización de miR-26a en cáncer de mama triple negativo

Abstract

[EN] Epigenetic modifications, and particularly microRNA-mediated ones, are important modulators of the expression of different genes involved in tumoral processes, due to its oncogenic or tumour suppressor role. Several studies have shown an aberrant microRNA expression in cancer, and its deregulation of expression compared to normal tissue is clear particularly in breast cancer. In previous studies, some microRNAs with relevant potential in response to treatment in triple negative breast cancer cell lines were selected. Triple negative breast cancer is a subtype of breast cancer only treated with chemotherapy due to its lack of a specific molecular target for a better treatment. This study evaluated the effect of these microRNAs in cell viability using triple negative breast cancer cell lines, and those with a strongest effect were selected. Inhibitors of these microRNAs were assayed in the same cell lines to test its reverting effect. Moreover, theoretical targets from these microRNAs and those proved in other cancers than breast cancer were analyzed and miR-26a was finally chosen by its interesting targets and results giving the name for this deeper study. miR-26a was proved to notably reduce cellular viability in MDA-MB-231, MDA-MB-468 and MCF-7 cell lines. miR-26a effect in cellular migration was also tested and it was shown that this microRNA increased migration. Furthermore, the expression of most interesting targets not validated in breast cancer was analyzed by qPCR when transfecting cells with miR-26a and CCNE2, BCL2, APAF1, PTEN, TP53 and E2F3 were determined to be microRNA-26a direct targets in triple negative breast cancer in a very statistically meaningful way. Similar results were obtained when PTEN was analyzed by Western Blot. On the other hand, treatment with metformin drug proved to reduce cell viability in our triple negative breast cancer cell lines. It was also analyzed miR-26a expression by qPCR and it was increased with metformin treatment, while its targets PTEN and BLC2 reduced its expression with metformin. Cell migration was also studied by Wound Healing assay and it was shown to increase when treating cells with metformin. This results suggest that miR-26a or metformin administration in triple negative breast cancer patients could be a valid strategy for the treatment of this type of cancer lacking of a specific therapy. Our study also highlights the importance of microRNA study in order to find a more specific target to treat triple negative breast cancer. (inglés)

[ES] Las modificaciones epigenéticas, y concretamente las mediadas por microRNAs, son importantes moduladoras de la expresión de diferentes genes involucrados en procesos tumorales, bien por su papel oncogénico o supresor de tumores. Diferentes estudios han mostrado una expresión aberrante de microRNAs en cáncer, y en concreto en cáncer de mama es evidente la desregulación en su expresión respecto al tejido sano. Mediante estudios previos se seleccionaron algunos microRNAs con potencial relevancia en respuesta al tratamiento en líneas celulares de cáncer de mama triple negativo, un tipo de cáncer sin tratamiento específico por falta de dianas moleculares específicas. En este trabajo se evaluó el efecto en la viabilidad celular de estos microRNAs en líneas celulares de cáncer de mama triple negativo y se seleccionaron aquellos que más efecto presentaban. De los seleccionados se probó a revertir sus efectos mediante inhibidores. También se buscaron dianas teóricas o ya validadas en otros tipos de cáncer de estos microRNAs y se seleccionó finalmente el miR-26a para un estudio más profundo por sus dianas interesantes y sus resultados, que da nombre a este trabajo. El miR-26a demostró reducir la viabilidad celular de las líneas celulares MDA-MB-231, MDA-MB-468 y MCF-7 de forma notable, por lo que se procedió a comprobar su efecto en la migración celular y se vio que sin embargo la aumentaba. Se analizaró la expresión de sus dianas más interesantes no validadas en cáncer de mama al transfectar cron miR-26a mediante qPCR y se determinó de manera muy significativa que los genes CCNE2, BCL2, APAF1, PTEN, TP53 y E2F3 son dianas directas del microRNA-26a en cáncer de mama triple negativo. Además, PTEN fue comprobado por Western Blot con los mismos resultados. Por otro lado, el tratamiento con el fármaco metformina demostró reducir la viabilidad celular en nuestras líneas de cáncer de mama triple negativo. Se analizó también la expresión de miR-26a y se comprobó por qPCR que aumentaba con el tratamiento, de la misma forma que disminuía la expresión de sus dianas PTEN y BCL2. Se analizó la capacidad de migración celular por Wound Healing al tratar las células con metformina y se vio que aumentaba de manera similar a transfectando con el mimético de miR-26a. Estos resultados sugieren que la administración de miR-26a o metformina en pacientes de cáncer de mama triple negativo podría ser una estrategia válida para el tratamiento de este tipo de cáncer que carece de terapia dirigida, y resalta la necesidad del estudio de más microRNAs oncogénicos y supresores de tumores que podrían suponer una diana más específica para tratar este tipo de tumores. (español)