Identificación de especies de Dactylonectria e Ilyonectria asociadas al pie negro de la vid en Castilla la Mancha

Abstract

[EN] Black foot is one of the most serious grapevine trunk diseases worldwide. This disease is caused by soilborne fungal species included into several genera and it is one of the most common diseases in young vines in Spain, especially in Castilla La Mancha region. Since 2002, the cases of young vines showing decline symptoms, analysed by the Servicio de Diagnóstico y Asistencia Fitosanitaria (SEDAF) from the Instituto Técnico Agronómico Provincial de Albacete (ITAP) have increased, being the fungi associated with black foot disease the most frequently detected. Fungal identification on this laboratory is currently based only on morphological data, however this methodology shows several disadvantages that hinder the correct species identification. The main aim of the present study was to set up a molecular method for the accurate identification of black foot pathogens in the SEDAF laboratory. This method is based on monosporic cultures establishment, DNA extraction, DNA amplification by PCR using a set of primers for histone H3 gene, sequencing of PCR products and phylogenetic analysis. Results showed that this protocol was set up properly and it was used for the identification of 26 isolates obtained from grapevines showing symptoms of black foot disease during the years 2014 and 2015. All isolates were identified as belonging to five different species: Dactylonectria torresensis, D. alcacerensis, D. novozelandica, D. macrodidyma e Ilyonectria liriodendri

[ES] El pie negro es una de las enfermedades de la madera de la vid que presenta mayor gravedad en la actualidad. Esta patología está causada por hongos del suelo pertenecientes a varios géneros y es una de las alteraciones más frecuentes en planta joven en España y, especialmente, en viñedos de Castilla La Mancha. Desde el año 2002, las consultas relativas a plantas jóvenes de vid con síntomas de decaimiento han sido frecuentes en el Servicio de Diagnóstico y Asistencia Fitosanitaria (SEDAF) del Instituto Técnico Agronómico Provincial de Albacete (ITAP), siendo los hongos asociados a la enfermedad del pie negro los detectados con mayor frecuencia. El SEDAF realiza la identificación de estos hongos a partir características fenotípicas, sin embargo este sistema no es el más adecuado porque, por su complejidad, dificulta la correcta identificación de las diferentes especies implicadas. Por ello el objetivo principal de este trabajo fue el establecimiento de un sistema de identificación molecular de especies fúngicas asociadas al pie negro de la vid en el laboratorio del SEDAF. Este sistema se basa en el establecimiento de cultivos monospóricos, la extracción de DNA, la amplificación de este por PCR, utilizando una pareja de cebadores correspondientes al gen de la histona H3, la secuenciación de los productos de PCR y su posterior análisis filogenético. Los resultados de este trabajo mostraron que se la implantación con éxito de esta metodología en el SEDAF, y permitiendo completar la identificación a nivel de especie de 26 aislados procedentes de vid con sistemas de decaimiento, recogidos durante los años 2014 y 2015. Éstos fueron identificados como pertenecientes a las especies: Dactylonectria torresensis, D. alcacerensis, D. novozelandica, D. macrodidyma e Ilyonectria liriodendri