Desarrollo de Técnicas histológicas aplicadas al estudio de constructos tisulares basados en andamios opacos

Abstract

[EN] The success of new Tissue Engineering techniques applied to regenerative medicine is conditioned by the correct relationship between the various components of the new tissues, namely cells and scaffolds and if some bioactive molecules that facilitate or enhance biological response. Among the different strategies to be developed in the field of tissue engineering are those that are aimed at the study of adhesion and cell interaction generally maintained and expanded in vitro, with biocompatible materials to be used as scaffolds. Histological analysis of developed constructs can be performed generally considering two approaches, either by processing the sample for subsequent collection of cuts, ie by observing the surface area of the full construct (techniques "whole mount") . The analysis of intact preparations provides information that can not be obtained, at least easily, by histological sections of the sample. Furthermore, some of the materials commonly used as scaffolds are very hard and can not be cut using standard techniques and procedures microtomy, so full analysis histological alternative construct is to be considered. However, in this case the opaque or translucent nature of some materials used in tissue engineering difficult observation of the sample by optical microscopy. In this paper we describe the procedures we have developed for maximum information histological samples of cells cultured in opaque materials, one of the preconditions to any process of integration in vivo stages.

[ES] El éxito de las nuevas técnicas de Ingeniería Tisular aplicadas a la Medicina Regenerativa está condicionado por la correcta interrelación entre los diferentes componentes de los neotejidos, a saber células y andamiajes y en su caso algunas moléculas bioactivas que faciliten o potencien la respuesta biológica. Dentro de las diferentes estrategias a desarrollar en este campo de la ingeniería tisular están aquellas que van destinadas al estudio de la adhesión y la interacción de células, en general mantenidas y expandidas in vitro, con materiales biocompatibles que van a ser utilizados como andamiajes. El análisis histológico de los constructos desarrollados puede realizarse, generalmente, considerando dos aproximaciones, sea mediante el procesado de la muestra para la posterior obtención de cortes, o sea mediante la observación de la zona superficial del constructo íntegro (técnicas de “whole mount”). El análisis de preparados íntegros proporciona información que no puede ser obtenida, al menos fácilmente, por el estudio histológico de secciones de la muestra. Además, algunos de los materiales habitualmente empleados como andamiajes son muy duros y no pueden ser cortados usando los procedimientos y técnicas habituales de microtomía, por lo que el análisis del constructo íntegro es la alternativa histológica que se debe considerar. Sin embargo, en este caso la naturaleza opaca o traslúcida de algunos materiales usados en ingeniería tisular dificulta la observación de la muestra mediante microscopia óptica. En este trabajo describimos los procedimientos que hemos desarrollado para obtener la máxima información histológica de muestras de células cultivadas en materiales opacos, una de las etapas previas a cualquier procedimiento de integración in vivo.