Caracterización del mecanismo de regulación de la transcripción llevado a cabo por el complejo MIP6-MEX67

Abstract

[EN] In eukaryotic cells, genetic expression requires efficient and proper transport of mRNAs from the nucleus to the cytoplasm. In recent years , the relation between human diseases and defects in mRNA export is becoming stronger and more evident.Major constituents of the mRNA export pathway have been identified and appear to be conserved from yeast to humans. Fully mature and correctly packaged yeast mRNP's are exported from the nucleus to the cytoplasm by a conserved export receptor, the MEX67-MTR2 heterodimer (TAP/P15 in humans), yet the role and affinity of MEX67 to mRNA and mRNA export proteins is under study. MIP6 was originally identified as MEX67 interacting protein (MIP) using a two hybrid assay in which the export factor Mex67 was used as a bait (Segref et al 1997). However, the role of MIP6 in the export of mRNA is still not clear. MIP6 have been to play a role as a shuttle protein between the nucleus and the cytoplasm in a Mex67 dependent manner (Rodriguez-Navarro 2009), suggesting a possible role in mRNA export. In this study we tried to characterize the mechanism by which MIP6 interacts with Mex67 using pull down assays and BLItz system of different constructs of the proteins to demonstrate the role of RNA binding in this complex. We also explored the binding affinity of MIP6 to non-specific RNA. Our results supports a possible role of MIP6 in mRNA binding and export.

[ES] En las células eucariotas, la expresión genética requiere un transporte eficiente y adecuado del mRNA desde el núcleo hasta el citoplasma. En los últimos años, se ha descubierto un numero creciente de conexiones entre enfermedades y defectos en la exportación de mRNA en humanos. Los principales constituyentes en la vía de exportación del mRNA de se han identificado y parecen estar conservadas desde levadura a seres humanos. En levaduras los mRNPs totalmente maduros y correctamente empaquetados se exportan desde el núcleo al citoplasma por un receptor de exportación conservado, el heterodímero MEX67-MTR2 (TAP/P15 en los seres humanos), sin embargo, el papel y la afinidad de MEX67 a las proteínas de exportación de mRNA y mRNA es objeto de estudio. MIP6 se identificó originalmente como proteína de interacción de MEX67 (MEX67 interacting protein MIP) utilizando un ensayo de doble híbrido en donde se utilizó el factor de exportación Mex67 como un cebo (Segref et al 1997). Sin embargo, no se definió el papel de MIP6 en la exportación de mRNA. MIP6 a desempeñando un papel como una proteína de enlace entre el núcleo y el citoplasma de una manera Mex67 dependiente (Rodriguez-Navarro 2009), lo que sugiere un posible papel en la exportación del mRNA. En este estudio hemos tratado de caracterizar el mecanismo por el cual MIP6 interactúa con Mex67 usando ensayos de pull down y sistema Blitz de diferentes construcciones de las proteínas para demostrar el papel de union del RNA en este complejo. También exploramos la afinidad de unión de MIP6 a RNA no especifico. Nuestros resultados apoyan un posible papel de MIP6 en la unión y la exportación del mRNA.