Estudio de la foto(geno)toxicidad del diclofenaco y sus metabolitos

Abstract

The diclofenac is a drug widely used for relieving mild to moderate pain that can be used in tablet forms as well as in gel for topical treatment. Exposure to sunlight after diclofenac administration is associated with an increased incidence of irritation, flare, skin eruptions and skin rash. The aim of this study is to evaluate drug-induced phototoxicity and photogenotoxicity and to analyse if the products of diclofenac metabolism also have a concern of photosensitizing potencial and therefore an influence in the toxicity related to diclofenac in combination with sun exposure. To achieve this, we are going to study the relative reduction in the viability and the DNA damage caused by the combined effects of UVA irradiation and diclofenac or its metabolites. With The 3T3 Neutral Red Uptake (3T3-NRU) phototoxicity test we calculate the PIF (Photo Irritation Factor), established by OECD to classified compounds by their phototoxic potencial. In order to know the photosensitizing mechanism involved, we study the photogenotoxic potential of diclofenac with the single cell electrophoresis assay or comet assay, measuring the % of DNA damage after fibroblast exposure to UVA irradiation in combination with diclofenac and its metabolites. Furthermore, we investigate DNA repair capacity of fibroblasts to determine the irreversible damage caused under different parameters. These assays will let us get a complete overview about the impact of the products of its metabolism in the photosensitizing potential associated to diclofenac.

El diclofenaco, es un fármaco ampliamente utilizado para el alivio de molestias leves, tanto en forma de comprimidos como de gel para uso tópico. La exposición solar tras su administración se ha asociado a un aumento de la incidencia de reacciones adversas a nivel tópico como irritación, enrojecimiento, erupción cutánea y picor. A través de este estudio queremos determinar la capacidad fototóxica y fotogenotóxica del diclofenaco y evaluar si los productos de su metabolismo poseen también propiedades fotosensibilizantes y, por tanto, también son responsables de la toxicidad asociada a la exposición a la radiación UV de este fármaco. Por ello, vamos a estudiar la disminución de la viabilidad y el daño en el DNA producidos por la radiación UVA en combinación con el diclofenaco y sus metabolitos a nivel celular. El ensayo de fototoxicidad de captación del rojo neutro (NRU-3T3) nos permitirá determinar el PIF (Photo Irritation Factor), que es el indicador establecido por la OECD para evaluar si un compuesto es considerado fototóxico. Por otro lado, con el fin de conocer el mecanismo por el que se produce esta acción fotosensibilizante, evaluaremos mediante el ensayo de electroforesis de célula única o ensayo COMET el potencial fotogenotóxico midiendo el % de daño que se produce en DNA al exponer fibroblastos a la radiación UVA en combinación con el diclofenaco y sus metabolitos. Además, analizaremos la capacidad de reparación del daño de los fibroblastos, lo cual, nos permite estudiar bajo qué condiciones el daño producido por los productos se vuelve irreversible. Esto nos va a permitir obtener una visión completa de la influencia de los productos del metabolismo en las propiedades fotosensibilizantes asociadas al diclofenaco.