Caracterización y aplicaciones potenciales de una columna monolítica funcionalizada con magnetita

Abstract

En este proyecto se ha optimizado una columna monolítica funcionalizada con magnetita (Fe3O4) para el análisis cromatográfico de fosfatos de adenosina (monofosfato de adenosina, difosfato de adenosina y trifosfato de adenosina), que interaccionan con el hierro presente en la columna a través de los grupos fosfato presentes en su estructura. Se ha partido de un estudio anterior en el que se estableció el procedimiento de preparación de estas columnas, así como la posibilidad de separar fosfatos de adenosina en unas condiciones determinadas. En primer lugar, se ha re-optimizado la fase móvil (composición y gradiente de separación) con la intención de mejorar la separación de los fosfatos de adenosina. Posteriormente, con la fase óptima, se ha optimizado la composición de la columna monolítica, así como su longitud y diámetro interno, a partir de la medida de los parámetros cromatográficos de tiempo de retención, eficacia, resolución y capacidad de pico. A partir del cálculo de los coeficientes de variación de las medias de tiempo de retención y área de pico obtenidos para los tres fosfatos de adenosina, se han establecido los parámetros de calidad de la columna: repetibilidad entre medidas, reusabilidad, y repetibilidad y reproducibilidad en la preparación de la columna.

In this project, the parameters of a monolithic column functionalized with magnetite (Fe3O4) have been optimized by the chromatographic analysis of adenosine and adenosine phosphates (adenosine monophosphate, adenosine diphosphate and adenosine triphosphate), due to the potential interactions between iron (present in the column) and phosphorus (present in the analysed compounds). The preparation procedure of this column was established in a previous study, as well as the possible separation of the three adenosine phosphates under specific experimental conditions. Firstly, on the basis of that study, composition and mobile-phase gradient was re-optimized to improve adenosine phosphates separation. Subsequently, by measuring some chromatographic parameters -retention time, efficiency, resolution and peak capacity-, the length, internal diameter and composition of the monolithic column were optimized. These analyses were carried out by using the optimal mobile phase. Figures of merit of the optimal column were established by means of chromatographic analysis of adenosine phosphates in optimal experimental conditions. Reusability, repeatability and reproducibility have been studied by calculating variation coefficients of retention time and peak area for the three adenosine phosphates.