Desregulación de microARNs en el cáncer de mama triple negativo: papel en la resistencia a quimioterapia

Abstract

[ES] El cáncer es una enfermedad que afecta a gran parte de la población, siendo el cáncer de mama el más frecuentemente diagnosticado en mujeres. Su incidencia está aumentando, siendo hoy en día la principal causa de muerte por cáncer en las mujeres a pesar de los avances en las técnicas de diagnóstico y del refinamiento de los tratamientos, que han permitido que la tasa de mortalidad haya disminuido en muchos países desarrollados. Actualmente, los investigadores se centran en desarrollar terapias dirigidas utilizando biomarcadores selectivos para cada tipo de cáncer. Existe la necesidad de identificar y validar nuevos marcadores moleculares, especialmente en aquellos subtipos de cáncer que carecen de dianas terapéuticas, como el cáncer de mama triple negativo. Una de las características más relevantes de este tipo de tumor es la ausencia de la expresión de los tres receptores clave en el cáncer de mama: ER, PGR y HER2, por lo que no existe una terapia específica contra este tipo de cáncer. Además, las células tumorales a menudo desarrollan resistencias a los fármacos, lo cual les permite sobrevivir a los tratamientos. Varios estudios de microarrays han demostrado que las líneas celulares sensibles y resistentes a los fármacos tienen perfiles de expresión de microARNs diferentes, los cuales pueden considerarse, además de biomarcadores, nuevas dianas terapéuticas contra el cáncer. El presente trabajo toma como punto de partida una investigación previa que consistió en el análisis de un microarray de microARNs que comparaba dos líneas celulares de cáncer de mama triple negativo, concretamente las líneas celulares MDA-MB-231 sensibles y resistentes a doxorrubicina. Teniendo en cuenta estos resultados previos, en este trabajo se seleccionaron para su estudio dos microARNs (miR-99a-5p y miR-503-5p) que estaban diferencialmente expresados en las células resistentes en comparación con las células sensibles. Concretamente, se realizaron ensayos de viabilidad celular mediante citometría de flujo y ensayos de proliferación celular con el reactivo WST-1 utilizando células transfectadas con moléculas miméticas e inhibidoras de ambos microARNs. Los fármacos testados fueron doxorrubicina, paclitaxel y ciclofosfamida, y la expresión diferencial de los microARNs se comprobó mediante PCR en tiempo real. Por tanto, el objetivo de esta investigación consistió en estudiar la influencia de la expresión de los miR-99a-5p y miR-503-5p en la resistencia a los fármacos doxorrubicina, ciclofosfamida y paclitaxel en la línea celular de cáncer de mama triple negativo MDA-MB-468. Los resultados obtenidos sugieren que sí existe una relación entre los niveles de expresión de ambos microARNs y la quimiorresistencia en células de cáncer de mama triple negativo.

[EN] General concern about cancer is out of question, being breast cancer the most frequently diagnosed in women. Its incidence is rising worldwide and it has become the leading cause of death from cancer in women despite improvements in diagnostic techniques and the refinement of treatments that have allowed the mortality rate to decrease in many developed countries. Currently, researchers focus on developing targeted therapies based on selective biomarkers for each type of cancer. Within this context, arises the need to identify and validate new molecular markers, especially in those subtypes of cancer that lack therapeutic targets, such as triple-negative breast cancer. One of the most significant characteristics of this type of tumor is the absence of the expression of the three key receptors in breast cancer: ER, PGR and HER2, so there is no specific therapy directly addressing this type of cancer. In addition, tumor cells often manage to survive by being able to develop drug resistance. Several microarray studies have shown that sensitive and drug resistant cell lines have different microRNAs expression profiles. Accordingly, microRNAs can be considered biomarkers and also new therapeutic targets against cancer. This work takes as a starting point a previous research analyzing a microarray of microRNAs that compared two triple negative breast cancer cell lines, particularly the MDA-MB-231 sensitive and resistant to doxorubicin cell lines. In this research, two microRNAs (miR-99a-5p and miR-503-5p) were selected for further study after proving they were differentially expressed in the resistant cells compared to the sensitive cells. Specifically, cell viability assays were performed by flow cytometry together with cell proliferation assays using WST-1 reagent, involving cells transfected with mimics and inhibitors of both microRNAs. The drugs under study were doxorubicin, paclitaxel and cyclophosphamide, and the differential expression of both microRNAs was checked by real time PCR. Therefore, the main goal of this research is to gain new knowledge about the way the expression of the miR-99a-5p and miR-503-5p influences on the resistance to doxorubicin, paclitaxel and cyclophosphamide in the triple negative breast cancer cell line MDA-MB-468. The results suggest that there is a relationship between the expression levels of both microRNAs and the chemoresistance in triple negative breast cancer cells.