Aplicaciones de la detección de las Glicoproteinas Mayoritarias de Superficie (MSG) de Pneumocystis jirovecii

Abstract

Pneumocystis es un hongo ascomiceto oportunista que se adapta a la vida dentro de los pulmones de los mamíferos y puede causar neumonía severa en pacientes inmunocomprometidos aunque hay evidencias convincentes que sugieren que esta infección puede ser patogénica para ciertos grupos de edad infantil. Actualmente, el método generalmente aceptado para su detección es la amplificación por PCR anidada de una región del gen que codifica el ARN ribosómico de la subunidad grande mitocondrial de Pneumocystis. Sin embargo, debido a sus limitaciones y riesgos considerables de contaminación se optimizó una real-time PCR, de ciclo único, basada en las principales glicoproteínas de superficie (MSG) de Pneumocystis, codificadas por una superfamilia multicopia exclusiva de genes relacionados pero distintos. Además, trabajos previos concluyen que son las proteínas más expresadas, encontrando de 64 a 179 genes únicos por especie. Mi trabajo final de máster se ha centrado en las posibles aplicaciones de la detección de las MSG, como el desarrollo de una curva estándar para poder determinar el número de copias en diferentes tipos de muestras biológicas de niños y análisis de los resultados, el estudio de la variabilidad de las MSG y la detección de los ARN mensajeros de Pneumocystis, mtLSUr RNA y MSG RNA que podría relacionarse con pacientes con neumonía (PCP) y diferenciarse de los pacientes colonizados.

Pneumocystis is an opportunistic ascomycete fungi that adapts to life within the lungs of mammals and can cause severe pneumonia in immunocompromised patients although there is evidence to suggest that this infection may be pathogenic for certain childhood age groups. Currently, the generally accepted method for detection is nested PCR amplification of a region of the gene encoding the ribosomal RNA of the large mitochondrial subunit of Pneumocystis. However, due to its limitations and considerable risk of contamination, a single-cycle, real-time PCR was optimized, based on the major surface glycoproteins (MSG) of Pneumocystis, coded by an exclusive multicopy superfamily of related but different genes. In addition, previous studies conclude that they are the most expressed proteins, finding 64 to 179 unique genes per species. My masters thesis was focused on the possible applications of MSG detection, such as the development of a standard curve to determine the number of copies in different types of biological samples of children and analysis of the results, the study of the variability of the MSG and the detection of the messenger RNAs of Pneumocystis, mtLSUr RNA and MSG RNA that could be related to patients with pneumonia (PCP) and differentiate from the colonized patients.