Obtención de doble haploides en berenjena (Solanum melongena) a partir del cultivo in vitro de microsporas aisladas

Abstract

La producción de doble haploides a través del cultivo de microsporas aisladas es una alternativa para obtener líneas puras mucho más eficaz que las técnicas de mejora genética clásica. Esta técnica presenta las ventajas de reducir considerablemente el tiempo y los recursos, materiales y humanos, necesarios para la obtención de líneas puras. En berenjena (Solanum melongena) esta técnica no está todavía puesta a punto. En este trabajo hemos conseguido optimizar esta técnica en berenjena, regenerando doble haploides de forma eficiente. Hemos demostrado también que tras la inducción, las microsporas forman embriones y que es en etapas más tardías de la embriogénesis cuando tiene lugar una desdiferenciación a callo. Los doble haploides regenerados fueron analizados mediante técnicas de citometría de flujo y marcadores moleculares, demostrando su origen androgénico. Ésta técnica ha sido aplicada a distintos genotipos de berenjena para seleccionar el que mejor responde a la inducción de androgénesis y a la regeneración. A partir del genotipo seleccionado, hemos ensayado una serie de factores que en otras especies tienen un efecto positivo en la inducción de androgénesis como son: butionin sulfoximina, ácido abcísico, epibrasinólido, fuentes de carbono alternativas a la sacarosa, osmóticos, cocultivo con microsporas de Brassica napus y goma arábiga. Con la mayoría de los factores se observaron efectos positivos a nivel de la respuesta androgénica, crecimiento o mejora en la calidad del material obtenido, llegando a obtener embriones en estadios más avanzados del desarrollo. Se ensayaron también métodos de disgregación mecánica del material obtenido, para la realización posterior de estudios de regeneración a planta completa de forma independiente del genotipo. Además de lo dicho, los resultados obtenidos abren nuevos caminos para continuar mejorando la eficiencia de los cultivos de microsporas de berenjena, y conseguir la obtención de doble haploides de forma rutinaria para su uso en programas de mejora.