Efecto de la crioconservación en embriones tempranos sobre el transcriptoma hepático tanto en fase fetal como en individuos adultos de conejo (Oryctolagus cuniculus)

Abstract

[ES] La vitrificación embrionaria es un proceso mediante el cual se pueden conservar embriones a largo plazo. Hasta el momento, se ha considerado una herramienta biotecnológica neutra, pero trabajos en conejo (Oryctolgus cuniculus) y otras especies parecen indicar lo contrario, ya que se han observado tanto cambios fisiológicos, como un menor peso del hígado, menor velocidad de crecimiento, mayor peso al nacer; como metabólicos. En consecuencia, en el actual trabajo, el objetivo fue determinar si las diferencias fisiológicas observadas en individuos adultos procedentes de embriones vitrificados, son consecuencia de un perfil transcriptómico diferencial entre la población control y la vitrificada. Además, se evaluó si estas diferencias se determinaron en la fase fetal, analizando el transcriptoma de la población control y la vitrificada en fetos de 24 días. Para ello, se analizó el perfil transcriptómico hepático a nivel adulto (40 semanas) y en fase fetal en poblaciones control y vitrificadas, permitiendo de esta forma, además realizar un estudio comparativo del transcriptoma hepático fetal y adulto. Para el análisis transcriptómico, se utilizaron técnicas ómicas de última generación como la secuenciación masiva del transcriptoma (Next Generation Sequencing; NGS). El análisis relevó que a nivel fetal los procesos involucrados en el ciclo celular y la regulación de procesos apoptóticos se encontraron significativamente alterados. En adultos, se observó un enriquecimiento de procesos relacionados con la regulación del crecimiento, división celular y procesos de respuesta al estrés. Cuando se realizó la comparativa de ambos transcriptomas, se encontraron rutas que fueron alteradas en la fase fetal y perduraron hasta la fase adulta, como alteraciones en el metabolismo proteico y lipídico, y en la regulación de la presión arterial, que puede desencadenar en hipoxia y daño celular. Algunas de estas alteraciones transcriptómicas coinciden con las encontradas en otros estudios en conejo. Finalmente, podemos concluir que la vitrificación embrionaria temprana es un proceso no neutro, que modifica tanto el fenotipo como el transcriptoma del hígado, pero sin observar alteraciones en la salud del animal.

[EN] Embryonic vitrification is a process by which long-term embryos can be preserved. So far, it has been considered a neutral biotechnological tool, but works in rabbit (Oryctolgus cuniculus) and other species seem to indicate the opposite, since both, physiological changes, such as a lower liver weight, slower growth, higher birth weight; as metabolic changes, have been observed. Consequently, in the current work, the objective was to determine if the physiological differences observed in adult individuals from vitrified embryos are a consequence of a differential transcriptomic profile between the control and vitrified population. In addition, it was evaluated whether these differences were determined in the fetal phase, analyzing the transcriptome of the control and vitrified population in fetuses of 24 days. To this end, the hepatic transcriptomic profile was analyzed in adults (40 weeks) and in the fetal phase in control and vitrified populations, thus allowing a comparative study of the fetal and adult hepatic transcriptome. For the transcriptomic analysis, last generation omic techniques such as the massive sequencing of the transcriptome (Next Generation Sequencing, NGS) were used. The analysis revealed that at the fetal level the processes involved in cell cycle and regulation of apoptotic processes were significantly altered. In adults, an enrichment of processes related to the regulation of growth, cell division and stress response were observed. When both transcriptomes were compared, pathways that were altered in the fetal phase and lasted altered until the adult phase were found, such as alterations in protein and lipid metabolism, and in the regulation of blood pressure, which can trigger hypoxia and cell damage. Some of these transcriptomic alterations coincide with those found in other rabbit studies. Finally, we can conclude that early embryonic vitrification is a non-neutral process, which modifies both the phenotype and transcriptome of the liver, but without observing alterations in the animal's health.