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Desarrollo de vectores virales basados en el virus del mosaico de la alfalfa y/o el virus del moteado del melocotonero para el silenciamiento de genes de interés en planta

RiuNet: Institutional repository of the Polithecnic University of Valencia

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Desarrollo de vectores virales basados en el virus del mosaico de la alfalfa y/o el virus del moteado del melocotonero para el silenciamiento de genes de interés en planta

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dc.contributor.advisor Aparicio Herrero, Frederic es_ES
dc.contributor.advisor Pallás Benet, Vicente es_ES
dc.contributor.advisor Sanchez Navarro, Jesus Angel es_ES
dc.contributor.author Villar Álvarez, David es_ES
dc.date.accessioned 2020-02-12T14:27:12Z
dc.date.available 2020-02-12T14:27:12Z
dc.date.created 2020-01-27 es_ES
dc.date.issued 2020-02-12 es_ES
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10251/136746
dc.description.abstract [ES] El silenciamiento génico o conjunto de mecanismos que impiden que un gen específico se transcriba, representa una herramienta muy útil que puede ser aplicada en diferentes áreas de biotecnología de plantas, biología celular, etc. El silenciamiento de genes actúa a dos niveles: silenciamiento génico transcripcional (Transcriptional Gene Silencing o TGS) y silenciamiento génico post-transcripcional (Post-Transcriptional Gene Silencing o PTGS). Los mecanismos de TGS incluyen modificaciones epigenéticas de regiones promotoras o alteraciones de la cromatina, que permiten el bloqueo de la transcripción de un determinado gen. En el caso del silenciamiento PTGS, los mecanismos actúan directamente sobre el RNA mensajero, induciendo su degradación o el bloqueo de su traducción, utilizando para ello moléculas de RNA de pequeño tamaño (de 20 a 25 residuos de nucleótidos) denominadas RNA de interferencia o RNAi. Gracias a estos mecanismos las células modulan la expresión génica de su propio ADN y además intentan evitar la expresión de genes que no son propios (genes de parásitos intracelulares como virus, bacterias y otros eucariotas). Existen diferentes formas de inducir el silenciamiento de un determinado gen incluyendo la sobreexpresión del gen diana, la expresión de regiones del gen como RNA de doble cadena o la utilización de secuencias reguladoras basadas en microRNAs (miRNA), dirigidas al gen de interés, entre otras. Sin embargo, estos métodos dependen de la transformación y regeneración mediada por Agrobacterium, en donde la eficacia de la transformación y las tasas de éxito de la regeneración son factores limitantes, observándose especies vegetales que no se han podido transformar o donde el proceso global puede requerir hasta varios años. Una alternativa al silenciamiento génico mediado por transformación por Agrobacterium, lo representa el silenciamiento génico inducido por virus (VIGS). Los virus de plantas presentan intermediarios de replicación de doble cadena de RNA, que inducen muy eficientemente el silenciamiento génico durante la infección. La disponibilidad de clones infecciosos de virus de plantas, que permiten la introducción de secuencias de exógenas, ha posibilitado el silenciamiento de genes del huésped, en plazos de tiempo muy reducidos (días). Sin embargo, la utilización de VIGS ha estado condicionada por la disponibilidad de clones infecciosos de virus que afecten especies de interés o que se acumulen en determinados tejidos. En el laboratorio disponemos de clones infecciosos para el virus del mosaico de la alfalfa (Alfalfa mosaic virus, AMV; género Alfamovirus) y el virus del mosaico del melocotonero (Peach mosaic virus, PcMV; género Trichovirus). Recientemente, hemos averiguado cómo modificar la proteína de movimiento de AMV (MP) sin afectar a su funcionalidad, permitiendo introducir secuencias de interés de hasta 200 residuos de nucleótidos. La MP del PcMV, al igual que la de AMV, pertenece a la familia 30K o conjunto de MPs virales de unos 30 kD que engloba a 18 géneros virales y cuyo miembro tipo es la MP del virus del mosaico del tabaco. Este hecho, sugiere que la MP del PcMV puede permitir la introducción de secuencias foráneas sin afectar a su funcionalidad, tal y como hemos observado con la MP de AMV. En el presente proyecto TFM abordaremos el desarrollo de los clones infecciosos de AMV y/o PcMV para su utilización como VIGS mediante la introducción de secuencias foráneas en la secuencia codificada la MP viral. Para ello, introduciremos secuencias de genes diana de la planta que den un fenotipo visible tras su silenciamiento, como la fitoeno desaturasa (phytoene desaturase, PDS). Delimitaremos la secuencia mínima requerida para inducir silenciamiento así como la región de la MP de PcMV que permite la introducción se secuencias exógenas. Ambos vectores se ensañarán en diferentes huéspedes tanto para hoja inoculada como sistémica. Fin es_ES
dc.language Español es_ES
dc.publisher Universitat Politècnica de València es_ES
dc.rights Reserva de todos los derechos es_ES
dc.subject Silenciamiento es_ES
dc.subject Vectores virales es_ES
dc.subject VIGS es_ES
dc.subject Alfamovirus es_ES
dc.subject Trichovirus es_ES
dc.subject.classification BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR es_ES
dc.subject.other Máster Universitario en Biotecnología Molecular y Celular de Plantas-Màster Universitari en Biotecnologia Molecular i Cel·Lular de Plantes es_ES
dc.title Desarrollo de vectores virales basados en el virus del mosaico de la alfalfa y/o el virus del moteado del melocotonero para el silenciamiento de genes de interés en planta es_ES
dc.type Tesis de máster es_ES
dc.rights.accessRights Cerrado es_ES
dc.contributor.affiliation Universitat Politècnica de València. Departamento de Biotecnología - Departament de Biotecnologia es_ES
dc.description.bibliographicCitation Villar Álvarez, D. (2020). Desarrollo de vectores virales basados en el virus del mosaico de la alfalfa y/o el virus del moteado del melocotonero para el silenciamiento de genes de interés en planta. http://hdl.handle.net/10251/136746 es_ES
dc.description.accrualMethod TFGM es_ES
dc.relation.pasarela TFGM\123955 es_ES


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