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DESARROLLO DE UN VECTOR PARA LA EXPRESIÓN SIMULTÁNEA DE MÚLTIPLES PROTEÍNAS EN PLANTAS BASADO EN EL POTYVIRUS DEL GRABADO DEL TABACO

RiuNet: Institutional repository of the Polithecnic University of Valencia

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DESARROLLO DE UN VECTOR PARA LA EXPRESIÓN SIMULTÁNEA DE MÚLTIPLES PROTEÍNAS EN PLANTAS BASADO EN EL POTYVIRUS DEL GRABADO DEL TABACO

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dc.contributor.advisor Daros Arnau, Jose Antonio es_ES
dc.contributor.author Bedoya Rojas, Leonor Cecilia es_ES
dc.date.accessioned 2011-12-02T10:24:00Z
dc.date.available 2011-12-02T10:24:00Z
dc.date.created 2011-11-28T09:00:00Z es_ES
dc.date.issued 2011-12-02T10:23:47Z es_ES
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10251/13833
dc.description.abstract Las plantas son útiles para la producción de proteínas heterólogas y otros productos de aplicación en medicina o industria, así como los virus de vegetales. El virus del grabado del tabaco (TEV), es un virus de RNA de cadena positiva ampliamente empleado en estudios sobre biología molecular de virus de plantas. Con base en un clon infeccioso de este virus, se ha desarrollado un vector viral desarmado que permite la expresión simultánea de múltiples proteínas heterólogas en plantas. Como primera etapa se construyeron 3 nuevos plásmidos con el mismo clon infeccioso del TEV que permitieran infectar plantas con RNA transcrito in vitro (pMTEV), con DNA (p35TEV) o por agroinoculación (pGTEV). El vector de expresión se construyó sobre el plásmido pGTEV, reemplazando el cistrón que codifica la proteína NIb por un casete que contenía los cDNAs de las proteínas heterólogas flanqueados por sitios de corte naturales y artificiales de la proteasa viral NIaPro. Se construyeron dos versiones del vector, uno que expresa tres proteínas fluorescentes, roja, amarilla y azul, y otro que expresa dos factores de transcripción de A. majus (Delila y Rosea1) de la ruta de biosíntesis de las antocianinas. Al inocular plantas de tabaco transgénicas, que suplementan la función NIb, se detectó la expresión colocalizada de las 3 proteínas fluorescentes tanto a nivel de tejido como subcelular, se comprobó el eficiente procesamiento de cada proteína heteróloga y se probó que el vector es incapaz de infectar plantas en las que la función NIb no se suplementa. En la expresión de Delila y Rosea1, la inoculación de plantas provocó una alta acumulación de antocianinas en los tejidos infectados por el virus adquiriendo una coloración rojiza. A continuación, se analizó el efecto de insertar un segundo supresor viral del silenciamiento, y los resultados sobre un vector que expresa la proteína fluorescente roja mostraron que la coexpresión de la proteína P19 del virus del enanismo arbustivo del tomate (TBSV) aumenta la expresión en aproximadamente un 50%, y la proteína 2b del virus del mosaico del pepino (CMV) la aumenta un 20%. En contraste, la proteína 16K del virus del cascabeleo del tabaco (TRV) no tiene ningún efecto, mientras que la proteína HC-Pro de otro potyvirus, el virus de la sharka de los frutales de hueso, tiene un efecto negativo. es_ES
dc.language Español es_ES
dc.publisher Universitat Politècnica de València es_ES
dc.rights Reserva de todos los derechos es_ES
dc.source Riunet es_ES
dc.subject Vector de expresión es_ES
dc.subject Proteínas heterólogas es_ES
dc.subject Clones infecciosos de virus es_ES
dc.title DESARROLLO DE UN VECTOR PARA LA EXPRESIÓN SIMULTÁNEA DE MÚLTIPLES PROTEÍNAS EN PLANTAS BASADO EN EL POTYVIRUS DEL GRABADO DEL TABACO
dc.type Tesis doctoral es_ES
dc.identifier.doi 10.4995/Thesis/10251/13833 es_ES
dc.rights.accessRights Abierto es_ES
dc.contributor.affiliation Universitat Politècnica de València. Departamento de Biotecnología - Departament de Biotecnologia es_ES
dc.description.bibliographicCitation Bedoya Rojas, LC. (2011). DESARROLLO DE UN VECTOR PARA LA EXPRESIÓN SIMULTÁNEA DE MÚLTIPLES PROTEÍNAS EN PLANTAS BASADO EN EL POTYVIRUS DEL GRABADO DEL TABACO [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/13833 es_ES
dc.description.accrualMethod Palancia es_ES
dc.type.version info:eu-repo/semantics/acceptedVersion es_ES
dc.relation.tesis 3693 es_ES


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