Expresión recombinante de los factores de iniciación de la traducción que integran el complejo multifactorial eucariótico

Abstract

[ES] La iniciación de la traducción es un proceso altamente regulado que implica la formación de varios complejos entre las subunidades ribosomales, el mRNA, el tRNAi y diferentes factores de iniciación (eIFs). Cada eIF tiene funciones específicas y actúa en diversas etapas del inicio de la traducción ya sea de forma individual o conjunta aumentando la cooperatividad del proceso. Este es el caso del llamado complejo multifactorial, formado por los factores eIF3, eIF2, eIF1, eIF5 (y quizá eIF1A). Con el objeto depoder entender la función del complejo y de cada uno de los eIFs que lo integran sería deseable obtener la estructura tridimensional (actualmente desconocida) de dicho complejo. El presente trabajo se ha centrado en el estudio de los factores de iniciación eIF1 y eIF3 de Escherichia coli. Estos componentes del complejo multifactorial han sido expresados y purificados y se han planteado con ellos estudios preliminares de interacción. Encontrar las condiciones óptimas para la interacción resultaría de gran utilidad para una futura caracterización estructural del complejo multifactorial mediante tinción negativa y criomicroscopía electrónica. Dado que el trabajo experimental ha debido ser interrumpido debido al SARS-Cov-2, parte del trabajo se ha realizado desde un punto teórico/hipótetico, en el que se han descrito los pasos necesarios para desarrollar experimentalmente el resto del trabajo.

[EN] Translation initiation is a highly regulated process that involves the formation of various complexes between the ribosomal subunits, the mRNA, the tRNAi and several initiation factors (eIFs). Each eIF has specific functions and acts at various stages of translation initiation either individually or collaboratively increasing the cooperativity of the process. This is the case of the so-called multi-factor complex, formed by the factors eIF3, eIF2, eIF1, eIF5 (and perhaps eIF1A). In order to understand the functionof the complex and of each of the eIFs that comprise it, it would be desirable to obtain the three-dimensional structure (currently unknown) of the complex. This work has focused on the study of the initiation factors eIF1 and eIF3 of Escherichia coli. These components of the multifactorial complex have been expressed and purified, and preliminary interaction studies have been carried out with them. Finding the optimal conditions for the interaction would be very useful for a future structural characterization of the multi-factor complex by negative staining and cryogenic electronic microscopy. Since the experimental work had to be interrupted due to SARS-Cov-2, part of the work has been performed from a theoretical/hypothetical point, in which the necessary steps to develop the rest of the work experimentally have been described.